Cải thiện khả năng biểu hiện protein Sumo-IL11 từ tế bào Escherichia coli bằng cách lựa chọn điều kiện lên men phù hợp

Bài viết này trình bày về kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố lên men đến mật độ tế bào và khả năng biểu hiện protein SUMO-IL11 của tế bào E. coli. Mời các bạn cùng tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Cải thiện khả năng biểu hiện protein Sumo-IL11 từ tế bào Escherichia coli bằng cách lựa chọn điều kiện lên men phù hợpTAPCHISINHHOC2015,37(1se):289295 DOI:10.15625/08667160/v37n1se. CẢITHIỆNKHẢNĂNGBIỂUHIỆNPROTEINSUMOIL11 TỪTẾBÀOEscherichiacoliBẰNGCÁCHLỰACHỌNĐIỀUKIỆNLÊNMEN PHÙHỢP NguyễnThịQuý,DươngThuHương,ĐặngThịNgọcHà, LêThịThuHồng,ĐỗThịHuyền,TrươngNamHải* ViệnCôngnghệsinhhọc,ViệnHànlâmKhoahọcvàCôngnghệViệtNam*tnhai@ibt.ac.vn TÓMTẮT:VikhuẩnEscherichiacolithườngđượcsửdụngđểsảnxuấtcácloạiproteintáitổ hợpchomụcđíchnghiêncứuvàthươngmại.Sựtíchlũyproteintáitổ hợpphụthuộcvàomật độtếbàocuốicùngvàhoạttínhriêngcủaprotein.Mộttrongnhữngcáchcảithiệnmứcđộtổng hợpproteinlàkiểmsoátchặtchẽđiềukiệnlênmen.Trongbàibáonày,chúngtôitrìnhbàykết quả nghiêncứu ảnhhưởngcủacácyếutố lênmenđếnmậtđộ tế bàovàkhả năngbiểuhiện proteinSUMOIL11củatếbàoE.coli.MôitrườngTBlàmôitrườnggiàudinhdưỡngvàcóđệm phosphatenênproteinSUMOIL11đượcbiểuhiệntốtnhất.Mậtđộ tế bàovàproteinSUMO IL11tănglênđángkểkhitếbàođượccảmứngở37 oCvớinồngđộIPTG0,05mMởthờiđiểm cảmứngOD600=2.Dướinhữngđiềukiệnnày,mậtđộtếbàođãtănglên9,4lần(từOD 600=2,07 lên19,48).LượngproteinSUMOIL11tạorađạt1,43g/l,tănggấp14,3lầnsovớibanđầuvà chiếm6,8%proteintổngsố. Từkhóa:Escherichiacoli,biểuhiệnprotein,proteintáitổhợp,proteinSUMOIL11.MỞĐẦU ứng… luôn là các yếu tố tác động đáng kể đếnsựbiểuhiệncủaproteintáitổhợpvàsinh Gần đây, Escherichia coli là đối tượng khốitế bào[1].Vìvậy,trướckhilênmen ởchínhđể biểuhiệnproteintáitổhợpvìchúng quymôlớnngườitađềuthămdònhữngyếucótốcđộ sinhtrưởngnhanh,dễ nuôicấytrên tố thích hợp nhằm nâng cao năng suất của môi trường không đắt tiền, việc thu hồi proteinđích.proteintáitổ hợpkhôngquáphứctạpvàcácchủngđềucósẵntrênthị trường.Tuynhiên, Interleukin11 người (IL11) là mộtproteintáitổhợpthườngbiểuhiện ởmứcđộ cytokineđachứcnăng,nókíchhoạtcáctiềntếthấp nên việc biểu hiện protein cần có quá bào tạo máu và các yếu tố sinh trưởng tạotrìnhtối ưuđể thuđượcnhiềusảnphẩmcó máukhácđểbiệthóavàthànhthụccáctếbàohoạttínhtrênmộtđơnvị thểtíchvàthờigian đạibàohaycòngọilàmegakaryocytes(chịu [2].Cónhiềuphươngphápkhácnhaunhằm tráchnhiệmchínhtrongsảnxuấttiểucầu).Ởcảithiệnsựbiểuhiệncủaproteintáitổhợplà bàibáotrước,chúngtôiđãtrìnhbàykếtquảsử dụngcácvectorbiểuhiệnphùhợphoặc tạochủng E.coli Rosetta2biểuhiệnprotein cácchủngcóthêmtRNAchomãhiếm,thiết IL11 dunghợpvớiproteinSUMO.Kếtquảkế chủngbiểuhiện,điềuhòaquátrìnhphiên khảosátbanđầuchothấyproteinSUMOIL11mãvàdịchmã.Ngoàira,kỹ thuậtbiểuhiện biểuhiệnmạnhvàđặcbiệtproteinởdạngtangendướidạngdunghợphayđồngbiểuhiện trongtế bào.Tuynhiên,mậtđộ tế bàosau4với chaperones cũng làm tăng hiệu quả sự giờ cảm ứngkhôngcao.Để thuđượcnhiều tổnghợpproteinđích ở tế bàochủ.Phương proteinSUMOIL11chonhữngnghiêncứusaupháphiệnnayđượcsửdụngphổbiếnnhấtlà này, cần phải khảo sát một số yếu tố ảnhnângcaosinhkhốitế bàobằngkỹ thuậtlên hưởnglênquátrìnhbiểuhiệngen ở bìnhtammen.Trongđó,thànhphầnmôitrường,nồng giác. Do đó, chúng tôi đã thăm dò sự ảnhđộ chất cảm ứng, nhiệt độ, thời điểm cảm hưởngcủathànhphầnmôitrường,nồngđộ 33IPTG,nhiệtđộ,thờiđiểmcảm ứngđếnkhả tếbàoE.coliRosetta2đượckhảosátnhưsau:năngbiểu hiện protein SUMOIL11trong E. ...