Một số kỹ thuật phân tích DNA và RNA Điện di và đo mật độ quang

Sinh viên Đào tách chiết DNA bộ gene từ tế bào động vật nuôi cấy rồi đo mật độ quang để kiểm tra chất lượng DNAthu nhận được. Giá trị mật độ quang của mẫu đã được pha loãng 20 lần ở bước sóng 260 nm là 1,675 và ở 280 nm là 1,290. Để cải thiện chất lượng mẫu tách chiết được, Đào đã tiến hành xử lý thêm mẫu DNA này. Sau khi xử lý, Đào thu nhận được 20 μl dung dịch DNA. Đào hút 10 μl DNA và thêm vào 30 μl TE rồi đi đo OD. Giá trị OD ở...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Một số kỹ thuật phân tích DNA và RNA Điện di và đo mật độ quang BÀI 3 MỘT SỐ KỸ THUẬT PHÂN TÍCH DNA VÀ RNA ĐIỆN DI VÀ ĐO MẬT ĐỘ QUANG YÊU CẦU - Nắm được nguyên lý của phương pháp điện di và đo mật độ quang - Biết các thao tác tạo 1 bản gel agarose, điện di, đo OD - Biết cách phân tích kết quả ĐIỆN DI Điện tích, kích thước và cấu hình - Giá thể - Điện thế - Thời gian phân tách - Nồng độ các chất cần phân tích ĐIỆN DI TRÊN GEL AGAROSE ĐIỆN DI TRÊN GEL AGAROSE Mức độ phân Agarose (%) tách (kb) 0.5 30 -1 0.7 12-0.8 1 10- 0.5 1.2 7-0.4 1.5 3-0.2 GEL POLYACRYLAMIDE VÀ AGAROSE Ethidium bromide Thang lamda HindIII 10 µl+ 10 µl = 20 µl RNA 50 µl DNA tế bào má E.coli Còn lại + 4µl dd nạp 20 µl DNA + 20 µl + 4 µl dd nạp mẫu 5 µl DNA mẫu 6X 40 µl TE1 X ĐIỆN DI ĐIỆN DI Bài 5 ĐO 0D 260, 280 -BiẾN TÍNH 10 ph 100O C -10 ph TRÊN ĐÁ - ĐO OD 260 KẾT QUẢ ĐO OD Nồng độ Nhóm OD260/280 OD 260 OD260 sau biến tính (µg/ml) Nhóm 1 1.1864 1.034 0.710 155.1 Nhóm 2 1.4875 3.286 2.770 492.9 Nhóm 3 1.8099 2.580 3.888 387 Nhóm 4 1.9818 1.593 2.679 238.950 Nhóm 5 1.925 0.717 1.080 107.55 Nhóm 6 2.5359 0.317 0.719 47.55 Nhóm 7 Nhóm 8 1.8679 2.404 3.052 360,6 KẾT QUẢ ĐiỆN DI BÀI TẬP Sinh viên Đào tách chiết DNA bộ gene từ tế bào động vật nuôi cấy rồi đo mật độ quang để kiểm tra chất lượng DNAthu nhận được. Giá trị mật độ quang của mẫu đã được pha loãng 20 lần ở bước sóng 260 nm là 1,675 và ở 280 nm là 1,290. Để cải thiện chất lượng mẫu tách chiết được, Đào đã tiến hành xử lý thêm mẫu DNA này. Sau khi xử lý, Đào thu nhận được 20 µl dung dịch DNA. Đào hút 10 µl DNA và thêm vào 30 µl TE rồi đi đo OD. Giá trị OD ở bước sóng 260 và 280 nm lần lượt là: 1,475 và 0.80. 1.Nhận xét chất lượng mẫu DNA ban đầu Đào thu nhận được 2.Qui trình và hóa chất Đào cần sử dụng để cải thiện chất lượng mẫu. 3.Tính lượng DNA Đào thu nhận được sau khi xử lý thêm