PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN

Kỹ thuật chống ngoại nhiễm sản phẩm khuếch đạiNguyên tắc PCR mix có thêm dUTP và men UNG (Uracil DNA glycosidase)Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi USản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG phá hủy trước khi thực hiện PCR
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢNPCRNHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢNNỘI DUNG Nguyên tắc PCR Phản ứng PCR Các loại PCR Real-time PCR Ứng dụng của PCR PCR chẩn đoán tác nhân vi sinh vậtNGUYÊN TẮC CỦA PCRThử nghiệm nhân bản 4 1một đoạn DNA trongống nghiệm dựa vào 2các chu kỳ nhiệt 3 n 2nNGUYÊN TẮC CỦA PCRChu kỳ nhiệt DNA đích3 giai đoạn : 1 Biến tính (94oC ) Biến tính Bắt cặp Kéo dài 2 Bắt cặp (55-65o C) 5’ 3’ 3’ 5’ 3 Kéo dài (72o C)PHẢN ỨNG PCRPCR mix Mồi Taq polymerase dNTP PCR PCR buffer + MgCl2 MIX DNA đích (Template)30X-40X 94oC/15s-1min 55-65oC/15s-1min 72oC/30s-3min PHẢN ỨNG PCRMáy luân nhiệt Tạo chu kỳ nhiệt Buồng ủ nhiệt Nhiệt độ lên xuống chính xác, đồng nhất Tốc độ tăng giảm nhiệt độ cực nhanh theo chu kỳPHẢN ỨNG PCRMen polymerase chịu nhiệt Tách chiết từ VK Thermus aquaticus (Taq polymerase) Tái tổ hợp từ VK E. coli / VK không chịu nhiệtPHẢN ỨNG PCRKỹ thuật chống ngoại nhiễm sản phẩm khuếch đạiNguyên tắc PCR mix có thêm dUTP và men UNG (Uracil DNA glycosidase) Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi U Sản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG phá hủy trước khi thực hiện PCRCÁC LOẠI PCRMonoplex PCR 940C for 30” PCR 40X 550C for 30” 720C for 01’CÁC LOẠI PCRMultiplex PCR 940C for 30” PCR 40X 550C for 30” 720C for 01’CÁC LOẠI PCRTouch down PCR 940C for 30” 05X 650C for 30” 940C for 30” PCR 05X 600C for 30” 940C for 30” 40X 550C for 30” 720C for 01’CÁC LOẠI PCRNested PCR 94oC for 30” PCR 40X 55oC for 30” 72oC for 01’ 94oC for 30” PCR 40X 55oC for 30” 72oC for 01’CÁC LOẠI PCRNonstop nested PCR 94oC for 30” PCR 10X 65oC for 30” 72oC for 01’ 94oC for 30” PCR 40X 55oC for 30” 72oC for 01’CÁC LOẠI PCRRT- PCR (one-step) RNA RNA RT RT (reverse (reverse transcription) transcription) PCR PCRCÁC LOẠI PCRRT- PCR (two-step) RNA RNA RT RT (reverse (reverse transcription transcription ) ) RT with specific RT with random primers primers PCR PCRReal-time PCRNguyên tắcReal-time PCRBiểu đồ khuếch đạiReal-time PCRBiểu đồ chuẩn