Phân lập epigallocatechin từ chè xanh Tân Cương - Thái Nguyên và nghiên cứu khả năng chống oxy hóa của chúng

Chè Tân Cương - Thái Nguyên (Camellia sinensis) từ lâu đã được sử dụng làm thức uống, gần đây còn được nghiên cứu sử dụng làm thực phẩm chức năng, có khả năng chữa bệnh, khả năng chống oxy hóa bảo vệ sức khỏe con người. Trong đó các catechin đóng vai trò quan trọng nhất. Bài báo này đề cập đến việc phân lập epigallocatechin trong chè xanh Tân Cương và khả năng chống oxy hóa của nó. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân lập epigallocatechin từ chè xanh Tân Cương - Thái Nguyên và nghiên cứu khả năng chống oxy hóa của chúng PH…N LŠP EPIGALLOCATECHIN TØ CH‘ XANH T…N C×ÌNG  THI NGUY–N V€ NGHI–N CÙU KHƒ N‹NG CHÈNG OXY HÂA CÕA CHÓNG Ph¤m V«n Khang Tr÷íng HSP-H Th¡i Nguy¶n é ¼nh R¢ng Tr÷íng HSP H  Nëi L¶ Xu¥n Qu¸ Vi»n Nhi»t îi, Vi»n Khoa håc v  Cæng ngh» Vi»t Nam 1 Mð ¦u Ch± T¥n C÷ìng  Th¡i Nguy¶n (Camellia sinensis) tø l¥u ¢ ÷ñc sû döng l m thùc uèng, g¦n ¥y cán ÷ñc nghi¶n cùu sû döng l m thüc ph©m chùc n«ng [1], câ kh£ n«ng chúa b»nh, kh£ n«ng chèng oxy hâa b£o v» sùc khäe con ng÷íi [2]. Trong â c¡c catechin âng vai trá quan trång nh§t [1]. B i b¡o n y · cªp ¸n vi»c ph¥n lªp epigallocatechin trong ch± xanh T¥n C÷ìng v  kh£ n«ng chèng oxy hâa cõa nâ. 2 Thüc nghi»m 2.1 Thi¸t bà v  hâa ch§t a. Thi¸t bà v  döng cö nghi¶n cùu: - iºm nâng ch£y ÷ñc o b¬ng m¡y o nhi»t ë nâng ch£y Gallenkamp, (Germany). - Phê hçng ngo¤i (IR) ÷ñc o tr¶n m¡y IMPAC -410 (vi¶n n²n KBr) cõa h¢ng CARL ZEISS. - S­c kþ läng  phê khèi (LC-MS): HP 1100 Agilant, cët C18, Synergi- Hydro-RP 80R, Phenomenex, US, detector: UV 254 nm. - Phê cëng h÷ðng tø h¤t nh¥n (NMR): Phê cëng h÷ðng tø h¤t nh¥n mët chi·u (1D NMR) 1 H NMR, 13 C NMR, hai chi·u (2D NMR), HMBC HSQC ÷ñc o tr¶n m¡y Bruker AVANCE 500MHz. - H» i»n hâa: AUTOLAB 30 (Eco Chemie B.V. Utrecht, The Netherlands), ph¦n m·m ghi v  xû lþ sè li»u GPES 4.9, Origin 6.0, Vi»n kÿ thuªt nhi»t îi, Vi»n khoa håc v  Cæng ngh» Vi»t Nam. b. Hâa ch§t nghi¶n cùu: - Dung mæi: etyl axetat, n-hexan, metanol, clorofom, axeton. 2.2 Ph¥n lªp epigallocatechin a. Chu©n bà dàch chi¸t Tø 7kg bóp ch± t÷ìi (mët bóp tæm v  hai l¡ k¸ ti¸p) ÷ñc ch¸ bi¸n theo quy tr¼nh truy·n thèng (s§y  vá  s§y  l¶n h÷ìng) thu ÷ñc 2,2kg m¨u khæ (M1 ) em b£o qu£n trong tói nilon tèi m u. Cho 1,5kg m¨u M1 v o b¼nh thõy tinh 10 l½t, ng¥m chi¸t vîi l÷ñng 1 dung mæi (CH3 OH : H2 O= 9:1 v/v) phò hñp rçi bàt k½n l¤i, °t nìi tèi, m¡t. Ng¥m tø 3 ¸n 5 ng y sau â chi¸t c§t thu hçi dung mæi d÷îi ¡p su§t th§p, ÷ñc 430 gam cao chi¸t metanol. b. Ph¥n lªp b¬ng s­c kþ cët L§y 50g cao chi¸t metanol trën ·u vîi l÷ñng tèi thiºu silicagel (Merck 60) cï h¤t 0,04 ¸n 0,063mm). S§y ð nhi»t ë kho£ng 40-45 o C º bay hìi h¸t dung mæi, ÷ñc hén hñp tìi. Cho ch§t l¶n cët sao cho lîp c°n chi¸t tr£i ·u tr¶n cët, cho mët lîp mäng sikicagel v  mët dóm bæng ð tr¶n. Ti¸n h nh ch¤y ên ành cët vîi dung mæi rûa gi£i clorofom v  etyl axetat. C§t cæ quay c¡c dung dàch s­c kþ d÷îi ¡p su§t th§p thu ÷ñc c¡c cao clorofom, etyl axetat thu ÷ñc 15g cao chi¸t etyl axetat dòng º ph¥n lªp ch§t. Ch¤y cët tinh ph¥n o¤n etyl axetat/n-hexan: 7/3 (v/v) thu ÷ñc 3 gam tinh thº khæng m u (Rf = 0,74) ph£n ùng m u vîi thuèc thû gçm K3 [F e(CN )6 ]1% v  F eCl3 1%), tinh thº h¼nh kim, nhi»t ë nâng ch£y 276-277 o C, câ gâc quay cüc l  - 45o trong metanol, tan tèt trong metanol, etanol, n÷îc, etyl axetat, axeton, tan ½t trong n-haxan (kþ hi»u l  RR). Ch§t RR ÷ñc tinh ch¸ l¤i qua cët sephadex LH-20 vîi h» dung mæi clorofom/etanol: 7/1 (v/v) v  ÷ñc kiºm tra ë tinh khi¸t s­c kþ läng  khèi phê (LC-MS) [3]. H¼nh 1. Tinh thº ch§t RR 2.3 Mët sè °c tr÷ng phê cõa hñp ch§t RR a. Phê hçng ngo¤i (IR-FT) cõa ch§t RR tr¶n b£n KBr: Sè sâng (cm−1 ): 3407 (rëng, tò, ch¥n p½c tø 2500 ¸n 3700 cm−1 ) l  dao ëng hâa trà cõa  OH câ li¶n k¸t hyro; 2967 (y¸u) l  dao ëng hâa trà Csp 3 − H ; 1628 (m¤nh, nhån), 1518 (trung b¼nh, nhån), 1450 (trung b¼nh, nhån) l  c¡c v¥n dao ëng cõa nh¥n thìm, 1150 (trung b¼nh, nhån) l  dao ëng hâa trà cõa C-O-C. b. Phê 1 H NMR cõa ch§t RR M¨u ch§t RR ÷ñc ph¥n t½ch NMR tr¶n l  m¡y Bruker Avance 500MHz (1 H-) vîi ch§t chu©n nëi l  TMS trong dung mæi CD3 OD; 6,54 (2H, s, H-12 ,H-16) ; 5,96 (1H, d, 4 J = 2,3, Hz, H6); 5,93 (1H, d, 4 J = 2,3Hz, H-8); 4,190 (1H, m, H-3) v¥n bëi, 4,817 (1H, d, J = 4,7Hz, H-2); 2,86 (1H, dd, 2 J = 16,73Hz v  3 J = 4,7Hz, Hb); 2,75 (1H, dd, 3 J = 4,7Hz v  2 J = 16,73Hz, Ha). c. Phê 13 C-NMR cõa ch§t RR vîi ch§t nëi chu©n TMS trong dung mæi CD3 OD (δ = 49,0ppm), ð t¦n sè 125 MHz, δ (ppm): 79,9 (C-2, CH); 67,5 (C-3, CH); 29,1 (C-4, 2 -CH2 -) tr¶n váng C ; 157,3 (C-5, CAr -OH) ; 96,4 (C-6, CAr -H); 157,9 (C-7, CAr -OH); 95,9 (C-8, CAr -H), 157,6 (C-9, CAr -O-), 100,2 (C-10,CAr ) tr¶n váng A; 131,5 (C-11,CAr ); 107 (C-12 v  C-16, CAr -H); 146,7 (C-13 v  C15, CAr -OH); 133,6 (C-14, CAr -OH) tr¶n váng B. d. Phê HSQC v  HMBC cõa ch§t RR v  c¡c phê NMR kh¡c ÷ñc tr¼nh b y ð b£ng 1 v  2 B£ng 1: Quy k¸t c¡c t½n hi»u tr¶n phê HS ...