Quyết định số 3348/2001/QĐ-BYT

Quyết định số 3348/2001/QĐ-BYT về việc ban hành “Thường quy kỹ thuật định lượng Clostridium perfringens trong thực phẩm” do Bộ Y tế ban hành
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Quyết định số 3348/2001/QĐ-BYT B YT C NG HOÀ XÃ H I CH NGHĨA VI T NAM ----- c l p – T do – H nh phúc ------- S : 3348/2001/Q -BYT Hà N i, ngày 31 tháng 7 năm 2001 QUY T NNH V VI C BAN HÀNH THƯ NG QUY K THU T NNH LƯ NG CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TRONG TH C PH M B TRƯ NG B YTCăn c theo Ngh nh s 68/CP ngày 11/10/1993 c a Chính ph quy nh ch c năng, nhi m v ,quy n h n và t ch c b máy c a B Y t ;Căn c theo Ngh nh s 86/CP ngày 08/12/1995 c a Chính ph v vi c phân công trách nhi m qu nlý nhà nư c i v i ch t lư ng hàng hóa;Căn c theo Quy t nh s 14/1999/Q -TTg ngày 04/02/1999 c a Th tư ng Chính ph v vi c thành l pC c Qu n lý ch t lư ng v sinh an toàn th c ph m;Theo ngh c a Chánh Văn phòng, V trư ng V Khoa h c ào t o, V trư ng V Pháp ch , ChánhThanh tra - B Y t và C c trư ng C c Qu n lý ch t lư ng v sinh an toàn th c ph m, QUY T NNH i u 1. Ban hành kèm theo Quy t nh này “Thư ng quy k thu t nh lư ng Clostridium perfringenstrong th c phNm”. i u 2. Quy t nh này có hi u l c k t ngày ký ban hành. i u 3. Các ông, bà: Chánh văn phòng, Chánh thanh tra, V trư ng các V : Khoa h c ào t o, Phápch , Y t d phòng - B Y t ; C c trư ng C c Qu n lý ch t lư ng v sinh an toàn th c phNm, Giám c S Y t các t nh, thành ph tr c thu c Trung ương và Th trư ng các ơn v tr c thu c B Y tch u trách nhi m thi hành Quy t nh này. KT. B TRƯ NG B Y T TH TRƯ NG Lê Văn Truy n THƯ NG QUY K THU T NNH LƯ NG CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TRONG TH C PH M (Ban hành kèm theo Quy t nh s 3348/Q -BYT ngày 31 tháng 7 năm 2001 c a B trư ng B Y t )I. NGUYÊN LÝ PHƯƠNG PHÁPVi khuNn C. perfringens (trong môi trư ng th ch Tryptose Sulfide Cycloserin (TSC)) trong i u ki nk khí s phát tri n thành các khuNn l c có màu en. Ch n khuNn l c i n hình, xác nh tính ch t sinhv t hoá h c theo thư ng quy.II. PH M VI ÁP D NGPhát hi n ô nhi m Clostridium perfringens trong nư c, th c phNm và th c ăn ch bi n s n.III. D NG C , MÔI TRƯ NG, THU C TH1. D ng c , thi t b- N i cách th y.- Bình nuôi c y k khí.- Pipet chia 1, 5, 10 ml.2. Môi trư ng, thu c th- Th ch Tryptose Sulfide Cycloserin (TSC agar).- Môi trư ng Iron - Milk.- Môi trư ng Lactoza gelatin.- Canh thang gan c c ho c canh thang th t.- Canh thang nuôi c y nha bào.- Dung d ch thioglycolat.- Dung d ch m glycerin - salt.- Nư c mu i m Pepton 9‰.- Thu c nhu m Gram.IV. CHU N BN MÔI TRƯ NG, THU C TH1. ChuNn b môi trư ngMôi trư ng nuôi c y, canh thang, nư c pha loãng và môi trư ng sinh v t hoá h c ư c pha ch theocông th c. Các môi trư ng ư c óng s n vào bình c u, bình nón, ng nghi m và ư c h p ti t trùng(110oC/30 phút ho c 121oC/15 phút)2. ChuNn b m u và dung d ch m u th2.1. Chu n b m uM u th c phNm ư c c t nh ho c xay nhuy n b ng máy trong i u ki n vô trùng cho t i khi ư c th ng nh t.Lưu ý: M u th c phNm n u xét nghi m sau 8 gi ph i ư c b o qu n trong dung d ch mu i m -glycerin (Buffer glycerin Salt Solution - BGS) b ng cách: ngâm th c phNm trong dung d ch BGS theot l 1:1 và b o qu n trong i u ki n l nh - 20oC.Trư c khi xét nghi m, ph i làm tan băng.2.2. Chu n b dung d ch m u th 10-1Cân chính xác 25 g th c phNm ã ư c chuNn b (ho c hút 25ml th c phNm l ng), cho vào bình nónch a s n 225 ml nư c mu i m pepton (BPW) 9‰.L c u 2 - 3 phút. Thu ư c dung d ch m u th 10-12.3. Chu n b dung d ch m u th 10- 2,10- 3,10- 4...- Hút chính xác 1ml dung d ch m u th 10-1 cho sang ng nghi m ch a s n 9ml nư c mu i m pepton9‰. L c u trong 2-3phút. Thu ư c dung d ch 10-2.- Ti p t c làm tương t như v y, ta thu ư c các dung d ch m u th tương ng 10-3, 10-4, 10-5.... (theosơ ).3. Phương pháp ti n hànhA. C y m vi khuNn trên ĩa th chBư c 1:- Rót 6 - 7 ml th ch TSC vào m i ĩa petri ã ư c ánh d u n ng pha loãng. L c cho th ch láng u m t ĩa.- Khi th ch ông ch t, l y pippet hút chính xác 1 ml m i n ng pha loãng dung d ch m u th nhlên m t th ch. M i n ng c y trong hai ĩa petri tương ng.- Rót ti p 15 ml th ch TSC vào m i ĩa petri ã ư c láng m u th . L c tr n u sao cho th ch ph u kh p b m t ĩa petri.- Khi th ch ông ch t, l t ngư c ĩa, t vào bình k khí (ví d các túi hóa ch t t o k khí ho c t mnuôi vi khuNn k khí). t bình k khí vào t m 350C/20 -24 gi .Bư c 2: c k t qu sơ b sau 24 gi- m toàn b các khuNn l c có các c tính: tròn, l i, b u, nh n, có màu en..- Tính s lư ng vi khuNn C. perfringens /1 g th c phNm b ng trung bình c ng gi a các ĩa nuôi c ycùng n ng pha loãng nhân v i h s pha loãng tương ng.* Ghi chú :- Ch m các ĩa th ch có kho ng 20 - 200 khuNn l c tính k t qu .- N u các khuNn l c phân b trên ĩa nuôi c y không rõ ràng thì ph i làm l i.Bư c 3: Xác nh hình th và tính ch t b t m ua) ChuNn b canh trùng thu n nh tCh n khuNn l c i n hình v i c i m: tròn, l i, b u, nh n, en trên ĩa th ch TSC c y vào 1 ngmôi trư ng canh thang thioglycolat ho c canh thang gan c c và canh thang nha bào. m 350C/18 - 24 gi . Thu ư c canh trùng thu n nh t.b) Hình th và tính ch t b t m u- T canh trùng thu n nh t, nhu m Gram xem hình th và tính ch t b t m u. C. perfringens là tr ckhuNn ng n, b t m u thu c nhu m Gram, Gr ( +).- Phát hi n kh năng sinh nha bào: nhu m Gram t canh thang nha bào th y: tr c khuNn ng n, tròn u, gi a có kho ng tr ng sáng không b t m u thu c nhu m.Bư c 4: Th tính ch t sinh v t h ...