Bài thuyết trình: Kĩ thuật chuyển gen

Nội dung bài viết trình bày phương pháp và kĩ thuật chuyển gen như: Tạo ADN tái tổ hợp, đưa ADN tái tổ hợp vào tế bào nhận và kiểm tra sự sát nhập của gen và biểu hiện của gen. Mời các bạn tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài thuyết trình: Kĩ thuật chuyển gen Mụclục1 A.KHÁINIỆMVỀKỸTHUẬTCHUYỂNGENVÀGENCHUYỂN1. Kháiniệmkỹthuậtchuyểngen Kỹ thuậtchuyểngen(ghépgen)làkỹ thuậtđưa1genlạ (1đoạnphantử ADNhoặcRNA)vàotếbàochủ,làmchogenlạtồntạiởcácplasmidtrongtếbàochủhoặc gắnvàobộgentếbàochủ,tồntạivàtáibảncùngvớibộgentếbàochủ.Genlạtrong tếbàochủhoạtđộngtổnghợpcácproteinđặchiệu, gâybiếnđổicácđặcđiểmđãcó2hoặclàm xuấthiệnnhữngđặcđiểmmới củacơ thể chuyểngen.Mụcđíchtạoragiốngsinhvậtmới. Kĩthuậtchuyểngengồmnhữngbướccơbảnsau: 1.TạoADNtáitổhợp 2.ĐưaADNtáitổhợpvàotếbàonhận 3.KiểmtrasựsátnhậpcủagenvàbiểuhiệncủagenQuytrìnhcủakĩthuậtchuyểngengiốngvớitạodòngnhưngcómụcđíchkhácnhau.Kĩthuậtchuyểngennhằmtạoragiốngsinhvậtmới. Nguyênlý:mộtđoạngenmongmuốnđượckhaithác,sauđóchúngđượctháotác cácyếutốcầnthiếtđểchuyểnvàohệgennhâncủatếbàonhận.Genchuyểncókhảnăngbiểuhiệnvàditruyềnổnđịnhởthếhệsau,đólànguyênlýcủacôngnghệnày.2. Genchuyển Genchuyểnlàcácgenmãhóatínhtrạngmongmuốnđượctáchchiếttừ cácsinh vậtkhácnhư độngvật,thựcvật,visinhvật...chúngmãhóacáctínhtrạngsố lượng,chấtlượng(nhưsảnlượngsữa,thịt),haymãhóamộtsốthànhphầnbổsung. Cấutrúccủagenchuyểnbaogồm2trìnhtự chính:Trìnhtự mãhóachophântửprotein(transgen–genchuyển)vàtrìnhtựđiềuhòa(promotervàenchancer). Để biểuhiệnproteintrongmôchuyênbiệt,cấutrúcgenphảichứatrìnhtự điều hòathíchhợp,cókhả năngphiênmãtrựctiếptrongmô.Vùngđiềuhòacóchiềudài khoảng100bp,kếthợpvớicácnhântố cishoặctransđể thamgiaquátrìnhphiênmã (khởiđộnghaykếtthúcquátrìnhphiênmã.3 Enhancer:mộtđoạnADNngắn,cóthể gắnvớiprotein(còngọilànhântố hoạt độngtrans),làmtăngmứcđộphiênmãcủagenmụctiêutrong1nhómgen,khôngphụthuộcvàovịtríđịnhhướngcủagen. *Ngoàiracònnhiềucấutrúckháccầngắnvàogenchuyển Cácmarkerchọnlọc:khigenchuyểnvàotếbào,chúngđượcnuôicấyđểsauđósànglọc,chọnranhữngtế bàođãđượcbiếnnạphoặctảinạpthànhcông.Gồm2 loại: +Cácmarkerchọnlọcdương(sảnphẩmcủagenchọnlọc)đượcsử dụnghiệuquả tronghầuhếtcácgenchuyển,nhằmchọnlọcnhữngtế bàođãnhậnđượccấutrúcgenchuyển(ởdạngtựdohayđãđượcsátnhậpvàobộgentếbàochủ). +Cácmarkerchọnlọcâmthườngđươcsửdụng:HSVtk,dtvàhprtđểchọnlọctếbàokhôngtồntạigenchuyểnhay1gennàođóbêntrong. Genbáocáo(reportergen)lànhữnggenmãhóachocácproteindễpháthiệngiúpbáocáovaitròhoạtđộngcủagen,đượcchènvào“bênsườn”củagenchuyển.Dựavàosự biểuhiệncủagenbáocáogiúpđánhgiásự điềuhòacủagenchuyểntrongtếbàohaymô. Polylinker: Ở cuốicáccấutrúcgencóthể đượcbiếnđổiđể hìnhthànhcác polylinkerchứamộtsốvị trínhậndiệncủacácenzymecắtgiớihạn.Polylinkercho phépcấutrúcgenchènvàonhữngvector,nhằmmụcđíchnhândòngvàkiểmtra. ADNgenchuyểnđượctạorabằngcáchsử dụngcácenzymecắtgiớihạnvàligase,gentừnhữngloạikhácnhaucóthểđượckếthợplạitrongốngnghiệmđểtạo thànhcấutrúcgenchuyển.4CấutrúcgenchuyểnATG:VịtríbắtđầuphiênmãSIG:TrìnhtựdấuhiệuAAA:đuôipolyA 3. Cácnguyênlýsinhhọc - Tạocácđiềukiệnsinhlýsinhhóa,hoăccưỡngbứcđể hệ tế bàochủ chấpnhậnyếutốlạ(genchuyển),tránhsựthảiloại - Genchuyểnphảivàođượctrongtếbàonhậnvàphảidiễnrasựdunghợpgiữa gentếbàovàogenchuyển - Genchuyểnphảiđượcbiểuhiệntrongtếbàochủ - Sốlượngcáthểnhậngenchuyểnphảiđượckhuếchđại(ditruyềnchothếhệconcái)đểditruyềnhiệuquảcủagenchuyển. - Tổhợpgencầnchuyểnphảiđượcchènchínhxácvàovịtrícầnthiếtđồngthời khốngchếđượcnhữngtácđộngtiêucựccủamôchủ.5 B.CÁCBƯỚCTRONGCHUYỂNGENI.TạoADNtáitổhợp1.Kháiniệmchung ADNtáitổhợp(recombinantADN)đượcdùngđểchỉcácphântử ADNđượctạo ratừhaihaynhiềuphânđoạnADNxuấtxứtừcácnguồngốckhácnhau.6*NhữngyêucầucủaADNtáitổhợp ADNtáitổ hợpphảiđạtđượcnhữngyêucầucầnthiếtcủamộtvectorchuyển gen. ADNtáitổhợpphảicóhoạttínhkhiđưavàotếbàochủ. ADNtáitổhợpphảicónhữngdấuhiệudễpháthiệntrongquầnthểvikhuẩn.Và dễquansátsựhoạtđộngvàbiểuhiệncủagentáitổhợp.2.ADNtáitổhợpđượcthựchiệnnhưthếnào?CácbướccơbảnthựchiệnADNtáitổhợp2.1.Chọnnguyênliệu ADN được chọn làm phương tiện vận chuyển gen (vector) thường ...