Công nghệ tế bào thực vật

Công nghệ nuôi cấy mô - tế bào thực vật là một trong những công nghệ quan trọng của Công nghệ Sinh học, nó là nền tảng để nghiên cứu và áp dụng các công nghệ khác trong lĩnh vực công nghệ sinh học thực vật. Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật đã được du nhập vào nước ta từ những năm 1960 tại miền Nam và vào đầu những năm 1970 tại miền Bắc
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Công nghệ tế bào thực vật TẠO GIỐNG MỚI BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY ĐỘT BIẾN VÀ CÔNG NGHỆ TẾ BÀOGiông cà chua Hông lan được ́ ̀ Giông ngô lai LVN10 là nhom giông ́ ́ ́ ngô dai ngay, được lai từ hai dong ̀ ̀ ̀tao ra từ thể đôt biên tự nhiên ̣ ̣ ́ thuân (lai đơn) và giông ngô LVN4 ̀ ́cua giông cà chua Ba lan trăng. ̉ ́ ́ đai diên cho nhom trưng bay, khả ̣ ̣ ́ ̀ năng thich ứng rông, cung nhom ́ ̣ ̀ ́ con có giông LVN98 và HQ2000). ̀ ́Giông dâu số 12 là giông dâu ́ ́tam bôi (3n) lai từ thể tứ bôi và ̣ ̣giông dâu Băc Ninh với giông ́ ́ ́lưỡng bôi (2n). Dâu có lá day, ̣ ̀mau xanh đâm, thit lá nhiêu, ̀ ̣ ̣ ̀sức ra rễ và tỉ lệ hom sông cao. ́NUÔI CẤY TẾ BÀO TRẦN VÀ ỨNG DỤNGkhái niệm và kỹ thuậttách tế bào trần thực vật a. KN: Tế bào trần thực vật(protoplast) là tế bào đã được loại bỏthành tế bào chỉ còn màng sinh chấtbao bọc khối tế bào chất và nhân tếbào. b. Tế bào trần được sử dụng trongnghiên cứu: + lai cùng loài hay khác loài + chuyển gen + có khả năng tạo màng tế bàonhanh chóng đây là cơ sở ngghiên cứuquá trình tổng hợp màng tế bàoc. Tách tế bào trần ( 2 cách : cơ học và enzym): sau đây là các bước cơ bản:- Mẫu lá non được rửa sạch với vòi nướcmáy.sát trùng bằng cồn 70-75 độ sau đó rửabằng nước cất 3 lần, sau đó khử trùng bằngNa-hypochlorit hay Ca-hypochlorit khảng 7-15phút. Lá làm sạch lá bằng Clorox 10% trong Lá10 phút, rửa lại lá 3 lần bằng nước cất tiệttrùng- Ngâm lá vào dung dịch mannitol 8-15%trong 45-60 phút để tế bào co nguyên sinh.- Tách lớp biểu bì mặt dưới lá để enzymngấm sâu vào nhu mô thịt lá.- Cắt lá thành từng mảnh nhỏ, ngâm 1g látrong đĩa petri. Dung dịch enzym gồmcellulase, hemicellulase,pectinase +manitol13%. Đặt mẫu trong tối qua đêm (12-18 giờ,ở 25 độ) thu được hỗn hợp protoplast.- Dịch protoplast ly tâm trong 5 phút, bỏphần bã nổi lên trên,protoplast ở đáy. Rửabằng 10ml dung dịch môi trường MS +Manitol 13%,thao tác thực hiện 3 lần.d. Xác định mật độ protoplast và khảnăng sống sót Nhuộm protoplast bằng Fluoresceindiacetate để xác định sự sống sót củaprotoplast. Số lượng protoplast đượcxác định bằng buồng đếm hồng cầu.e. Nuôi cấy protoplastDung hợp tế bào trần và lai vô tínha. Tự dung hợp vì màng sinhchất của tếbào(-) do nhómP và Protein nêncác tế bào trầnđẩy nhau nênkhông tự dunghợp. Do đó phảilàm các rế bàotrần tiếp xúcnhau nhờ PEGhay sốc điện. b. Hóa dung hợp: Sự hóa dung hợp có thể thực hiện với NaNO3 0,25M, PVA15 %…nhưng tần số dung hợp thấp nên ít được sử dụng. Virut Senday đã giảm hoạt tính là chất th ường dùng hi ệnnay bằng cách cho giọt hỗn hợp 2 loại tế bào trần tiếp xúc t ừtừ với các giọt PEG 25- 50% c.Điện dung hợp (tốtnhất): Khi đặt hỗn hợp 2 loại tế bào trần trong 1 điện trường, các tế bào trần sẽ di chuyển, tiếp xúc nhau và xếp thành 1 chuỗi dài dưới lực điện trường Sau đó dùng xung điện ngắn đẻ tạo vết đứt ở màng, sự dung hợp sẽ xảy ra tại nơi tiếp xúc.Khi dung hợp tế bào trần với nhau thường có ba nguồn gen tham gia (nhân, ty thể, lạp thể). Có thể xảy ra các hiện tượng: - chỉ dung hợp nguyên sinh chất và các cơ quan tử - chỉ có sự dung hợp nhân - có cả dung hợp nhân và tế bào chất Ứng dụng: bằng phương pháp lai tế bào đã thành công trong tạo cây lai từ hai loài thuốc lá khác nhau, cây lai giữa khoai tây và cà chua.POMATO ...