Phát hiện nhanh Enterovirus 71 và Coxsackievirus A16 bằng phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt vòng lặp (RT-LAMP)

Trong nghiên cứu này, qui trình RTLAMP được tối ưu có khả năng phát hiện EV71 và CA16 với giới hạn 1 fg đối với EV71 và 10 fg đối với CA16; Phản ứng được thực hiện tại nhiệt độ cố định (60°C) trong 35 phút; Kết quả có thể được xác định bằng mắt thường thông qua màu sắc của phản ứng thể hiện tiềm năng ứng dụng cao của phương pháp đối với chẩn đoán bệnh tại chỗ.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện nhanh Enterovirus 71 và Coxsackievirus A16 bằng phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt vòng lặp (RT-LAMP)18 Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 14 Phát hiện nhanh Enterovirus 71 và Coxsackievirus A16 bằng phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt vòng lặp (RT-LAMP) Trần Hồng Diễm*, Phùng Thị Thu Hường Viện Kĩ thuật Công nghệ cao, Đại học Nguyễn Tất Thành * thdiem@ntt.edu.vn Tóm tắt Bệnh tay chân miệng (TCM), thường gặp ở trẻ dưới 5 tuổi, gây ra bởi các chủng vi rút Nhận 18.12.2020 thuộc họ enterovirus, trong đó hai tác nhân chính là Coxsackievirus A16 (CVA16) và Được duyệt 31.05.2021 Enterovirus 71 (EV71). EV71 và CVA16 có thể gây nên các biến chứng như viêm não, Công bố 15.07.2021 viêm cơ tiêm, dẫn đến tử vong. Cho đến nay, vẫn chưa có vắc xin và thuốc đặc hiệu trị EV71 và CVA16. Vì thế việc phát hiện chẩn đoán nhanh hai loại vi rút này là rất cấp thiết. Phương pháp phát hiện bệnh hiện nay chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng, kĩ thuật sinh học phân tử RT-PCR đang là tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán TCM. Tuy nhiên, RT-PCR đòi hỏi thiết bị phức tạp, đắt tiền và chỉ có thể thực hiện trong điều kiện phòng thí nghiệm. Trong khi đó, RT-LAMP thừa hưởng tất cả ưu điểm của RT-PCR về độ nhạy, tính đặc hiệu; hơn nữa, kĩ thuật lại đơn giản và dễ thực hiện. Trong nghiên cứu này, qui trình RT- LAMP được tối ưu có khả năng phát hiện EV71 và CA16 với giới hạn 1 fg đối với EV71 Từ khóa và 10 fg đối với CA16; phản ứng được thực hiện tại nhiệt độ cố định (60°C) trong 35 phút; EV71, CA16, kết quả có thể được xác định bằng mắt thường thông qua màu sắc của phản ứng thể hiện RT-LAMP, tiềm năng ứng dụng cao của phương pháp đối với chẩn đoán bệnh tại chỗ. isothermal ® 2021 Journal of Science and Technology - NTTU 1 Tổng quan đặc hiệu với vi rút và phát hiện trình tự gen của vi rút bằng kĩ thuật khuếch đại axit nucleic [4,5]. EV71 và Tay chân miệng (TCM) là bệnh truyền nhiễm phổ biến CVA16 có thể được phân lập từ nhiều mẫu bệnh phẩm ở trẻ nhỏ với các triệu chứng đặc trưng sốt, loét trong khác nhau, luôn cần (1 - 2) tuần để có kết quả [5]. Các miệng và mụn nước trên bàn tay và bàn chân [1]. Bệnh xét nghiệm IgM dựa trên kĩ thuật miễn dịch enzym đã chủ yếu do hai tác nhân thuộc họ enterovirus gây ra là được phát triển [5-6], nhưng những xét nghiệm này đòi human enterovirus 71 (EV71) và coxsackievirus A16 hỏi thiết bị chuyên dụng và cần mẫu huyết thanh, rất (CVA16) [1]. Đây là loại bệnh có khả năng lây lan khó thu thập từ bệnh nhân trẻ sơ sinh. Các xét nghiệm nhanh tạo thành dịch bệnh và có khả năng dẫn đến tử PCR phiên mã ngược (RT-PCR) và realtime RT-PCR vong với các biến chứng nặng liên quan đến viêm màng (RT-qPCR) được xem là tiêu chuẩn vàng trong chẩn não, viêm cơ tim, viêm phổi cấp [1-3]. Vì thế việc phát đoán phát hiện EV71 và CVA16. Tuy nhiên, các hiện và phân biệt nhanh nhiễm EV71 và CVA16 để đưa phương pháp này đòi hỏi thiết bị chuyên dụng, đắt tiền ra phương pháp điều trị lâm sàng và kiểm soát bệnh kịp và kĩ thuật viên có kinh nghiệm, vì thế chỉ có thể thực thời là rất cấp thiết do hiện nay chưa có vắc xin hoặc hiện trong khu vực thí nghiệm chuyên biệt, hạn chế thuốc kháng vi rút đặc hiệu cho các trường hợp nhiễm trong chẩn đoán trực tiếp. nặng. Phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian Hiện nay, chẩn đoán EV71 và CVA16 trong phòng thí vòng lặp (LAMP) là một phương pháp khuếch đại nghiệm bao gồm phân lập vi rút, phát hiện kháng thể Đại học Nguyễn Tất ThànhTạp chí Khoa học & Công nghệ Số 14 ...