Ứng dụng kỹ thuật PCR chẩn đoán não mô cầu

Đề tài đã tiến hành ứng dụng được kỹ thuật PCR để phát hiện người nhiễm não mô cầu (NMC) theo loài, nhóm và đánh giá kết quả chẩn đoán ở cấp độ sinh học phân tử ADN. Đã ứng dụng được kỹ thuật PCR trong chẩn đoán, phát hiện NMC được loài trong 7 mẫu bệnh phẩm với kết quả 100% dương tính (+) với loài NMC. Đồng thời đã ứng dụng kỹ thuật Multiplex-PCR để phát hiện nhóm với 15 mẫu bệnh phẩm đã phát hiện được kết quả 10/15 (67%) mẫu dương tính (+) với NMC nhóm B.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kỹ thuật PCR chẩn đoán não mô cầu ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR CHẨN ĐOÁN NÃO MÔ CẦU NGUYỄN VĂN RƯ, NGUYỄN THỊ LOAN – Trường Đại học Dược Hà Nội LÊ THU HÀ – Viện Vệ sinh Phòng dịch Quân Đội TÓM TẮT sinh học phân tử. Đề tài đã tiến hành ứng dụng được kỹ thuật PCR ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP để phát hiện người nhiễm não mô cầu (NMC) theo 1. Đối tượng nghiên cứu loài, nhóm và đánh giá kết quả chẩn đoán ở cấp độ Bệnh nhân (BN) được chẩn đoán lâm sàng là sinh học phân tử ADN. viêm màng não hoặc nhiễm khuẩn huyết nghi do não Đã ứng dụng được kỹ thuật PCR trong chẩn đoán, mô cầu tại các bệnh viện quân đội từ tháng 3/2008 phát hiện NMC được loài trong 7 mẫu bệnh phẩm với đến 04/2012 được lấy mẫu bệnh phẩm. kết quả 100% dương tính (+) với loài NMC. Đồng thời Người tiếp xúc gần với BN từ 04/2011 đến đã ứng dụng kỹ thuật Multiplex-PCR để phát hiện nhóm 04/2012 được lấy mẫu bệnh phẩm. với 15 mẫu bệnh phẩm đã phát hiện được kết quả 10/15 Nguyên vật liệu, thiết bị (67%) mẫu dương tính (+) với NMC nhóm B. Mẫu bệnh phẩm Kết quả PCR của các mẫu máu, dịch não tủy (+) Gồm có 6 mẫu dịch nhày họng, 4 mẫu dịch não với vi khuẩn NMC đã hỗ trợ để đánh giá, phân tích và tủy và 5 mẫu máu. Các mẫu được lấy theo đúng kỹ xác định được đối tượng bị bệnh NMC. Trong trường thuật, được hòa tan trong 2-4 ml dung dịch NaCl hợp khác, dịch nhày họng (+) với NMC chỉ xác định 0,85%, bảo quản ở 2-80C và tiến hành phân tích được đối tượng bị nhiễm NMC và chưa thể khẳng trong 24-48h, cần để lâu hơn phải bảo quản ở -180C. định NMC là nguyên nhân gây bệnh và đó là trường Hóa chất, sinh phẩm. hợp người lành mang trùng. Kit tách DNA của hãng QIAamp DNA Mini Kit [9]. Từ khóa: kỹ thuật PCR, loài và nhóm não mô Mồi cho phản ứng PCR: Trình tự mồi. cầu, chẩn đoán sinh học phân tử. Tube 0,2 ml, 1,5 ml, 2 ml đã được khử trùng [5]. SUMMARY Multiplex PCR kit [9]. Has application PCR techniques in the diagnosis of Taq PCR mastermix kit (Qiagen) [9]. meningitis, to detect species in seven samples with Agarose 100% positive results (+) with meningitis species. At Ethidiumbromide the same time has technical applications Multiplex- Các loại pipetman 10, 100, 200, 1000 l PCR to detect groups with 15 specimens found results Trình tự mồi để phản ứng 10/15 (67%) samples positive (+) NMC Group B. Trình tự dùng trong PCR phát hiện loài NMC [5] Results of PCR of blood, cerebro-spinal fluid (+) gồm các mồi sau: 5’- ccagcggtattgtttgggtgg-3’ và 5’- bacteria with the meningitis has supported to assess, caggcggcctttaataatttc-3’, gen khuếch đại là ctrA để analyze and identify the object it affects meningitis. In phát hiện NMC nhóm, kích thước là 176 bp. other cases, the throat mucus (+) with the meningitis Trình tự mồi dùng trong Multiplex – PCR phát hiện only identify infected objects meningitis and can not nhóm gồm: confirm that meningitis was the cause of disease and - Trình tự mồi: 5’cgcaataggtgtatatattcttcc-3’ và 5’- that is the case the carrier status of the medium. cgtaatagtttcgtatgccttctt-3’, gen khuyếch đại là orf-2 Keywords: PCR techniques, Multiplex-PCR, (A), kích thước 400bp meningitis, blood, cerebro-spinal fluid, throat mucus. - Mồi: 5’-ggatcatttcagtgttttccacca-3’ và 5’- ĐẶT VẤN ĐỀ gcatgctggaggaataagcattaa-3’, gen khuyếch đại là Bệnh nhiễm não mô cầu là loại bệnh viêm do vi siaD (B) kích thước 450 khuẩn Neisseria meningitidis, bệnh có các chứng - Mồi: 5’-tcaaatgagtttgcgaatagaaggt-3’ và 5’- viêm nặng ở chất dịch và lớp màng bọc xung quanh tcaaatgagtttgcgaatagaaggt-3’, gen khuyếch đại là não (viêm màng não), trong máu (nhiễm khuẩn siaD (C) kích thước 250 huyết), phổi (viêm phổi), và khớp xương (viêm khớp). - Mồi: 5’-cagaaagtgagggatttccata-3’ và 5’- Bệnh lây qua đường hô hấp, gây tổn thương riêng rẽ cagaaagtgagggatttccata-3’ gen khuyếch đại là siaD hay phối hợp các cơ quan như đường hô hấp, máu, (W135), kích thước 120bp hệ thần kinh, khớp, màng ngoài tim, mắt… Có thể -Trình tự mồi: 5’-ctcaaagcgaaggctttggtta-3’ và 5’- gây ra đại dịch, tác động lớn về mặt y tế, xã hội [2]. ctgaagcgttttcattataattgctaa-3’ gen khuyếch đại là siaD Kỹ thuật PCR đã được ứng dụng ở Việt Nam để (Y), kích t ...