Tiểu luận: Phương pháp PCR và ứng dụng

Đề tài được nghiên cứu nhằm mục đích tìm hiểu rõ hơn về các nguyên tắc, chỉ tiêu ảnh hưởng, ứng dụng và hạn chế của phương pháp PCR. Từ đó người viết có những kiến thức cơ bản phục vụ cho việc nghiên cứu đề tài của luận văn cũng như việc tiến hành các thí nghiệm trong phòng thí nghiệm sau này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tiểu luận: Phương pháp PCR và ứng dụng TRƯỜNGĐẠIHỌCSƯPHẠMHANỘI KHOASINHHỌC BÀITIỂULUẬN PHƯƠNGPHÁPPCRVÀỨNGDỤNG Chuyênngành:LýluậnvàphươngphápdạyhọcSinhhọc Ngườihướngdẫn:GS.TS.NguyễnThànhĐạt PGS.TS.ĐặngHữuLanh Sinhviênthựchiện:CaoThịDungL ớp:SinhCHK24 1HàNội2015 234 MỞĐẦU Phản ứngchuỗitrùnghợp(PolymeraseChainReaction–PCR)doKary Mullispháthiệnranăm1985.Đâylàphươngphápinvitrođểnhânbảnnhanhmột đoạnANDnàođó,cóđộnhạyrấtcaomàchỉcầnmộtkhốilượngmẫubanđầu hạnchế.Bảnthânkỹthuậtnàychỉlàsựmởrộngtrựctiếpcáctínhchấtcủaquá trìnhtáibảnAND.NhưngnóđãđượcsửdụngtheonhiềucáchkhácnhauđểlàmchoviệctáchdòngvàthaotácvớiANDdễdàngvàhiệuquảhơn. PCRlàkỹthuậtcơbảnvàrấtquantrọngtrongSinhhọcphântử.ViệcsửdụngkỹthuậtPCRtronglĩnhvựcANDtáitổhợpđãtạoramộtbướctiếnmang tínhcáchmạngđốivớiditruyềnhọcphântử nóiriêngcũngnhư vớisinhhọcphântửnóichung,nhờviệcchophépphânlập,xácđịnhcácgenevàđisâunghiêncứuchứcnăngcũngnhưbiểuhiệncủagentrongquátrìnhpháttriển,hoặcphảnứngcủagenđốivớicácđiềukiệnmôitrường.Nóchophéptatiếnhànhnhữngnghiêncứumàtrướcđâykhôngcókhả năngthựchiện.Kỹ thuậtnàyđãđược ứngdụngtrongnhiềulĩnhvựccủasinhhọcphântử,chẩnđoáncácbệnhdi truyềnởngười,ditruyềnquầnthể,phântíchphápy,… Việctriểnkhaicác ứngdụngcủasinhhọcphântử thườngvấpphảitrởngạivềsốlượngvậtchấtditruyềncầncó.Cácphươngpháptạodònginvitrođã biếttuygiảiquyếtđượcvấnđềvềsốlượngnhưnglạiđòihỏithaotácphứctạpvàthờigiandài.Sự rađờicủanhiềuphươngphápkhuếchđạiinvitrocóchọn lọc,trongsốđónổitiếngnhấtphảikểđếnphươngphápPCRđãđảolộnnguyên tắccủaviệctạodòngcổđiển,mởranhữngtriểnvọngứngdụngtolớn. Chínhvìvậytôiđãquyếtđịnhnghiêncứuđềtài“PhươngphápPCRvàứngdụng”. Đề tàiđượcnghiêncứunhằmmụcđíchtìmhiểurõhơnvề cácnguyên tắc,chỉtiêu ảnhhưởng,ứngdụngvàhạnchế củaphươngphápPCR.Từ đócó nhữngkiếnthứccơbảnphụcvụchoviệcnghiêncứuđề tàicủaluậnvăncũng nhưviệctiếnhànhcácthínghiệmtrongphòngthínghiệmsaunày. 1 Đểđạtđượcđiềuđó,đềtàiđãsửdụngcácphươngphápnghiêncứunhưphươngphápthuthập,xử lýthôngtin,phươngphápphântích,tổnghợp,hệthốnghóathôngtin… NgoàiphầnMởđầu,Kếtluận,bàitiểuluậnbaogồmnhữngnộidungsau:1.SựpháthiệnraphươngphápPCR.2.PhươngphápPCRvàứngdụng. 2 1.SỰRAĐỜICỦAPHƯƠNGPHÁPPCR1.1.Kháiniệm PCRlàchữ viếttắtcủacụmtừPolymeraseChainReaction,đượcgọilà“phản ứngchuỗitrùnghợp” hay“phản ứngkhuếchđạigen”.PCRlàmộtkỹthuậtphổ biếntrongsinhhọcphântử nhằmkhuếchđại(tạoranhiềubảnsao)mộtđoạnDNAmàkhôngcầnsử dụngcácsinhvậtsốngnhưE.colihaynấmmen[7]. MộtđoạnDNAbấtkỳcóthểđượcnhânlênnhanhchónghàngtỷlầnmà khôngcầnđưavàotếbàovikhuẩn[3].Điềuđóxảyratrongphảnứngtổnghợpinvitrosử dụngDNApolymerasevàcácoligonucleotide(cácmồi–primers).Đó chínhlàkếtquả tuyệtvờicủaphản ứngPCR.Nhờ phản ứngnày,mộtđoạn DNA ở mộtvùngbấtkỳ tronggenomeđượckhuếchđạilênrấtnhiềulầnkhitrìnhtựnucleotideởhaiđầuđoạnmạchDNAđóđãbiết.Dựavàotrìnhtựđó,cáccặpoligonucleotideđượctổnghợpnhântạo,mồioligotạoliênkếtvớitừngsợiđơn.Chúngđượcsửdụnglàmmồiđể tổnghợpDNAinvitronhờ enzymeDNApolymerase.Đặcbiệtphản ứngPCRchỉ đòihỏimộtlượngDNAbanđầulàmkhuônrấtnhỏ(cỡ103μg)[3]. Như vậy,PCRlàphươngphápinvitrođể tổnghợpvàkhuếchđạimộtđoạn DNA đặc thù nhờ công hiệu của hai mồioligonucleotidegắnvàohaisợiđôicủađoạnDNAđíchvớisựthamgiacủaDNApolymerase.1.2.LịchsửcủaphươngphápPCR Vàonăm1985,trongmộtđêmtrăngsáng ởtiểubangCalifornia,trênđườngláixedọctheobờ 3biển,mộtýtưởngchợtxuấthiệntrongđầucủamộtnhàsinhhóahọcrấtbìnhthường,làmviệccũngtạimộtphòngthínghiệmrấtbìnhthường.Ýtưởngnàykhitrở thànhh ...