Rút sắc tố từ lá và thực hiện một số phản ứng lí hoá học của clorophin

Do có nhân Mg trong vòng pyron mang tính tan trong nước và kết hợp với protein màng, trong khi đó đuôi dài cacbon của gốc rượu phytol lại mang tính kị nước và hướng tới cấu trúc lipit của màng tilacoit, nên phân tử clorophin chủ yếu hoà tan trong dung môi hữu cơ.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Rút sắc tố từ lá và thực hiện một số phản ứng lí hoá học của clorophin Bài thực hành 1 Rút sắc tố từ lá và thựchiện một số phản ứng lí hoá học của clorophin1. Nguyên tắc của phương phápDo có nhân Mg trong vòng pyronmang tính tan trong nước và kết hợpvới protein màng, trong khi đó đuôidài cacbon của gốc rượu phytol lạimang tính kị nước và hướng tới cấutrúc lipit của màng tilacoit, nên phântử clorophin chủ yếu hoà tan trongdung môi hữu cơ. Tuy nhiên để táchtốt clorophin ra khỏi lá, người takhông dùng ête petrol hay benzen, màdùng cồn hay axeton pha với một ítnước để tách được hết phân tửclorophin từ lá. Các sắc tố của nhómcarotenoit cũng được tách chiết theophương pháp này.2. Đối tượng, hoá chất và dụng cụ thínghiệm- Lá tươi- Đũa thuỷ tinh- Cồn etilic hoặc axeton 80%- Giá ống nghiệm và các ốngnghiệm- Benzen - KOH 20%- KOH 20%- HCL 10%- Axetat đồng- CaCO3- Bột thuỷ tinh- Phễu lọc số 3- Pipet- Kéo- ống nhỏ giọt- Đèn cồn- Giấy lọc- Diêm- Cối chày sứ3. Các bước tiến hànhLá tươi được cắt nhỏ trong cối sứ (vứtbỏ phần gân lá), thêm một ít bột thuỷtinh cho dễ nghiền, một ít CaCO3 đểtrung hoà độ axit của dịch tế bào.Nghiền các mẩu lá cùng với một ítdung môi (cồn hoặc axeton 80% đãchuẩn bị) đến khi thành một thể đồngnhất. Thêm dung môi, rửa chày sứ,dùng đũa thuỷ tinh đổ dung dịch vàoống nghiệm qua phễu lọc.Dung dịch sắc tố thu được sẽ đượcdùng để đo hàm lượng sắc tố và tiếnhành một số thí nghiệm nhằm chứngminh các tính chất lí, hoá học củaclorophin.a.Xác định hàm lượng clorophinĐem dịch chiết sắc tố đo trên máyquang phổ ở các bước sóng 663nm,645nm. Sau đó sử dụng các công thứcđể tính hàm lượng các sắc tố thànhphần như sau:Clorophin a (mg/ l): 12,7. OD 663 -2,69. OD 645Clorophin b (mg/ l): 22,9. OD 645 -4,68. OD 663Ghi chú: Công thức này sử dụng chodung môi là axeton 80% , OD là số đotrên máy quang phổ ở các bước sóngxác định.Cũng trên dung môi này, nếu đo ở cácbước sóng khác, có thể dùng các côngthức khác như:Clorophin a (mg/ l): 11,63. OD 665 -2,39. OD 649Clorophin b (mg/ l): 20,11. OD 649 -5,18. OD 665Clorophin a (mg/ l): 11,78. OD 664 -2,29. OD 647Clorophin b (mg/ l): 20,05. OD 647 -4,77. OD 664Sau đây là một vài công thức khác khisử dụng các dung môi khác nhau:- Dung môi axeton 100 %:Clorophin a (mg/ l): 11,70. OD 662 -2,09. OD 644Clorophin b (mg/ l): 21,19. OD 644 -4,56. OD 662- Dung môi ête êtilic 100 %:Clorophin a (mg/ l): 10,1. OD 662 -1,01. OD 644Clorophin b (mg/ l): 16,4. OD 644 -2,57. OD 662- Dung môi 96 % êtanol:Clorophin a (mg/ l): 13,70. OD 665 -5,76. OD 649Clorophin b (mg/ l): 25,80. OD 649 -7,60. OD 665- Dung môi metanol 100 % :Clorophin a (mg/ l): 16,5. OD 665 -8,3. OD 650Clorophin b (mg/ l): 33,8. OD 650 -12,5. OD 665b.Quan sát hiện tượng huỳnh quangĐặt ống nghiệm chứa dịch sắc tố ragần cửa sổ có ánh sáng trên một nềnđen hoặc gần bóng đèn điện. Quan sátmàu của dịch sắc tố ở ánh sáng phảnxạ, ta thấy dịch sắc tố có màu đỏ thẫm- màu của rượu vang.Đó chính là hiện tượng huỳnh quangcủa clorophin.Hiện tượng huỳnh quang cũng có thểquan sát ở các cây sống. Đối tượng tốtđể quan sát là tảo, rêu thuỷ sinh. Cácđối tượng này đặt trên lam kính rồiquan sát dưới kính hiển vi bằng ánhsáng xanh tím. Sẽ quan sát thấyclorophin trong lục lạp có màu đỏthẫm.c. Phản ứng với bazơĐổ vào 4 ống nghiệm, mỗi ống 2 mldịch sắc tố và tiến hành các thínghiệm sau:- ống 1 làm đối chứng- ống 2: nhỏ 4 - 5 giọt KOH 20 %, lắcđều, cho thêm 4 giọt benzen, lắcmạnh rồi để yên.Dung dịch sẽ xảy ra phản ứng xàphòng hoá:COOCH3 COOKC32H30ON4Mg + 2 KOH =>C32H30ON4Mg + CH3OH + C20H39OHCOOC20H39 COOKMuối của clorophin cũng có màuxanh, xong khác với clorophin làkhông tan trong benzen. Như vậy màucủa cồn và benzen khác nhau khi sosánh với đối chứng.d. Phản ứng với axitLấy 2 ống nghiệm còn lại, cho vàomỗi ống 2 - 3 giọt HCL 10%, ta sẽ cóchất pheophytin có màu nâu xám, vìMg đã bị thay thế bằng 2 nguyên tửhidro theo phản ứng sau:COOCH3 COOCH3C32H30ON4Mg + HCL=>C32H30ON4 + MgCL2COOC20H39 COOC20H39Sau khi quan sát màu của dịch sắc tố,ta lại tiếp tục cho vào một trong haiống nghiệm dung dịch axetat đồng,sau đó đun sôi dung dịch trên nồi cáchthuỷ. Màu nâu xám của dịch lại dầntrở lại màu xanh lục đậm. Như vậyliên kết kim loại lại được tái lập, tứclà Cu thay thế chỗ của Mg.4. Kết luận: Clorophin là este của axitdicacboxilic. ...