Ứng dụng của HPLC ghép đầu dò điện hóa (HPLC/ECD) để định lượng và xác định hệ số hấp thu phân tử của ANTHOCYANIN trong dịch trích là lobelia

Anthocyanin là hợp chất mang màu có nhiều trong hoa quả. Phần lớn chúng có màu đỏ và xanh, ngoài ra cũng có màu cam, tím rất thích hợp cho việc thay thế màu tổng hợp. Ngoài ra, các anthocyanin có khả năng kháng oxy hóa rất mạnh. Đề tài đã dùng phương pháp HPLC/UV/MS để xác định cấu trúc anthocyanin, phương pháp HPLC/UV/ECD để xác định hệ số hấp thu phân tử của anthocyanin từ đó tính được nồng độ của chúng trong dịch trích lá cây Lobelia (Đan Mạch).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng của HPLC ghép đầu dò điện hóa (HPLC/ECD) để định lượng và xác định hệ số hấp thu phân tử của ANTHOCYANIN trong dịch trích là lobeliaTạp chí Đại học Công nghiệpỨNG DỤNG CỦA HPLC GHÉP ĐẦU DÒ ĐIỆN HÓA (HPLC/ECD) ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG VÀ XÁC ĐỊNH HỆ SỐ HẤP THU PHÂN TỬ  CỦA ANTHOCYANIN TRONG DỊCH TRÍCH LÁ LOBELIA Hoàng Thị Kim Khuyên*, Torben Lund** TÓM TẮT Anthocyanin là hợp chất mang màu có nhiều trong hoa quả. Phần lớn chúng có màu đỏ vàxanh, ngoài ra cũng có màu cam, tím rất thích hợp cho việc thay thế màu tổng hợp. Ngoài ra, cácanthocyanin có khả năng kháng oxy hóa rất mạnh. Đề tài đã dùng phương pháp HPLC/UV/MS để xácđịnh cấu trúc anthocyanin, phương pháp HPLC/UV/ECD để xác định hệ số hấp thu phân tử củaanthocyanin từ đó tính được nồng độ của chúng trong dịch trích lá cây Lobelia (Đan Mạch) Từ khóa: Cây bã thuốc Lobelia, anthocyanin, hệ số hấp thu phân tử , sắc ký lỏng hiệu năngcao, đầu dò điện hóa, đầu dò tử ngoại, đầu dò khối phổ APPLICATION OF HPLC-UV/Vis COUPLED WITH ECD TO QUANTIFY AND DETERMINE EXTINCTION COEFFICIENT  OF ANTHOCYANINS IN LOBELIA EXTRACT SUMMARY Anthocyanins which are much in plants are colorful substances. Almost anthocyanins are red, blue,orange, violet that are suitable to replace artificial colour. Besides, anthocyanins are strong antioxidants. Inthis thesis we used HPLC/UV/MS to determine the structures of anthocyanin, HPLC/UV/ECD to determine. From then we can quantify their concentration in Lobelia extract (from Denmark). Key word: Lobelia, anthocyanin, extinction coefficient , HPLC, ECD, UVD, MSD 1. Giới thiệu Chúng tôi đề nghị phương pháp xác định  của Cây Lobelia còn gọi là cây bã thuốc mọc từng anthocyanin trực tiếp khi qua cột sắc kýhoang nhiều ở Sapa, Cù Măng Chải (Lào Cai). bằng cách kết hợp phương pháp HPLC-UV/VisDịch chiết lá Lobelia chứa thành phần với đầu dò ECD.anthocyanin khá cao. Việt Nam với lợi thế Diện tích peak UV =     l  C (1)phong phú về hoa quả, việc áp dụng quy trình Diện tích peak ECD = F    Vtiêm  C  n (2)để xác định hàm lượng anthocyanin trong dịchchiết hoa quả nhằm nâng cao hiểu biết về dinh Trong đó ,  là hệ số của máy có thểdưỡng cho người tiêu dùng là điều cần thiết. tìm thấy từ nhà sản xuất hoặc tính toán dựa trênChính vì thế, đề tài “Ứng dụng của HPLC ghép chất chuẩn; F là hằng số Faraday = 96500.đầu dò điện hóa ECD để định lượng và xác định Chia (1) cho (2):hệ số hấp thu phân tử trong dịch chiết lá DientichUV F    n  Vtiem    (3)Lobelia” là hết sức cần thiết. DientichECD  2. Mục đích nghiên cứu dientichpeakUV Thế vào (1) →C  Do tính chất phức tạp của nhóm anthocyanin và hạn chế về chất chuẩn nên khó Muốn tính  từ phương trình (3) thì phảikhăn để định lượng trực tiếp. Mục đích của đề xác định được , , ntài là xác định trực tiếp các anthocyanin từ dịchtrích, muốn vậy phải biết chính xác giá trị .* Trường Đại học Công nghiệp TP.HCM** Trường Đại học Roskidle, Đan Mạch 49Ứng dụng của HPLC ghép đầu dò điện hóa… 2.1. Xác định các hệ số ,  Máy LC-UV/MS LCQ Deca Diện tích peak ECD = ∫U×dt = R×∫Idt = Cột Phenomenex 502mm kích thướcR × Q =  × n × Vtiêm × F × [C] hạt 3micron. Autosample thể tích tiêm 4L cho Hệ số góc =  × n × Vtiêm × F  Lobelia Cardinalis. Nhiệt độ cột bằng với nhiệt độ phòng18oC. Bước sóng đầu dò UV đượcDiện tích peak UV =     l  [C] quét từ 190- 800nm. Các thông số ESI: khí trơ Hệ số góc =     l  N2 (12 L/phút), bộ khuếch đại tứ cực và bát cực. Bẫy ion phổ khối ở dạng ion dương, m/z 2.2. Xác định số điện tử trao đổi n quét từ 200-1200. Dùng phương pháp kết hợp giữa hai diệntích UV với diện tích ECD để nghiên cứu hoạt Chương trình gradient cho hệtính điện hóa của các anthocyanin LC/MS/MS 3. Đối tượng, nội dung nghiên cứu 3.1. Đối tượng nghiên cứu - Lá cây Lobelia: lá tươi được đông côchân không, nghiền mịn và chiết anthocyaninbằng cách đánh siêu âm. - Hóa chất: Acetonitrile tinh khiếtHPLC- grade, Merck (Germany, Darmstadt),Formic acid, MeOH. Nước cất được chuẩn bịtrong hệ thống nước tinh khiết Milli- Q 3.2. Nội dung nghiên cứu(Millipore, Bedford, MA, USA), các loại 3.2.1. Chuẩn bị dịch chiết lá Lobeliaanthocyanin chuẩn gốc dạng bột. Lá cây được đông cô chân không ở áp - Thiết bị: máy siêu âm, Máy HPLC đầu suất 0.01mbar, sau hai ngày nghiền mịn bằngdò UV/Vis kết hợp ECD (hãng Dionex), máy đo cối đá. Cân 10 – 20 mg mẫu trong ống nghiệm,quang. Hệ dung môi của sắc ký lỏng Dionex t ...