Xây dựng bộ KIT phân biệt thịt heo và thịt bò bằng phương pháp sinh học phân tử

Nghiên cứu này xây dựng bộ KIT để phân biệt thịt heo và thịt bò dựa vào kỹ thuật multiplex PCR để giúp quá trình phân biệt các loại thịt này trở nên đơn giản hơn. Kết quả này hi vọng góp phần giảm vấn nạn gian lận thương mại đối với sản phẩm thịt tươi cũng như các sản phẩm chế biến từ thịt. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng bộ KIT phân biệt thịt heo và thịt bò bằng phương pháp sinh học phân tửKỷ yếu Hội nghị khoa họcXÂY DỰNG BỘ KIT PHÂN BIỆT THỊT HEO VÀ THỊT BÒ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ Hồ Viết Thế*, Ngô Thị Kim Anh, Phạm Thị Tuyết Trinh Nguyễn Hiếu Thuyên, Hồ Lê Quỳnh Trinh Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM *Tác giả liên lạc: thehv@cntp.edu.vn TÓM TẮTXác định các loại thịt bằng phương pháp sinh học phân tử trở nên phổ biến trong những thậpniên qua vì mức độ chính xác cao. Trong nghiên cứu này, chúng tôi phát triển bộ KIT phân biệtthịt heo và thịt bò dựa trên kỹ thuật multiplex PCR thông qua việc khuếch đại các đoạn DNAđặc trưng trên hai gene ty thể là COI và ND5. Kết quả tối ưu hóa của phản ứng multiplex PCRđượ hoàn thiện thành bộ KIT. Kết quả thực nghiệm cho thấy rằng bộ KIT đạt độ chính xác caovà có thể áp dụng cả ở thịt tươi và các sản phẩm thịt đã qua chế biến.Từ khóa: Thịt bò, thịt heo, multiplex PCR, KIT. DEVELOP MOLECULAR BIOLOGY- BASED KIT TO DISTINGUISH BETWEEN PORK AND BEEF Ho Viet The*, Ngo Thi Kim Anh, Pham Thi Tuyet Trinh Nguyen Hieu Thuyen, Ho Le Quynh Trinh Ho Chi Minh city University of Food Industry *Corresponding Author: thehv@cntp.edu.vn ABSTRACTIdentifying meat by molecular markers has become ubiquitous in the past decades. In this study,multiplex PCR –based detectionn KIT was developed to distinguish between pork and beefrelying on the presence of specific DNA fragments on two mitochondrial genes consisting ofCOI and ND5. After optimization, the obtained KIT could differentiate beef from pork with highaccuracy and this KIT is also applicable for identifiying both raw meats and meat-proccessedproducts.Keywords: Beef, pork, multiplex PCR, KIT.MỞ ĐẦU sinh học phân tử nên các phương pháp phânCùng với sự phát triển về kinh tế, nhu cầu sử biệt thịt dựa vào DNA cho kết quả chính xácdụng thực phẩm chất lượng cao cũng tăng hơn. Trong đó, phương pháp PCR dễ thựctheo, đặc biệt trong đó có thịt bò [1]. Tuy hiện, cho kết quả chính xác với độ nhạy caonhiên, hiện nay nhiều trường hợp người buôn trong thời gian ngắn [3]. Năm 1999, nhómbán vì lợi nhuận đã dùng hóa chất để làm giả nghiên cứu của Matsunaga đã phát hiện 6 loạithịt bò từ nguyên liệu là các loại thịt khác [2]. thịt (bò, heo, cừu, dê, ngựa, gà) từ thịt tươi vàĐiều này gây ảnh hưởng đến việc kinh doanh, thịt chế biến bằng kỹ thuật multiplex PCR [4].sản xuất cũng như sức khỏe người tiêu dùng. Gần đây, Kitpipit và cộng sự đưa ra nhữngVì vậy, việc tìm ra phương pháp phân biệt thịt bước tiến mới trong việc phát hiện các loại thịtheo và thịt bò một cách nhanh chóng, chính bằng cách thực hiện PCR trực tiếp mà khôngxác phục vụ người tiêu dùng cùng các nhân cần tách chiết DNA trước với primer đượcviên kiểm tra thực phẩm là hết sức cần thiết. thiết kế từ cytochrome ty thể (cyt b),Những phương pháp phân biệt thịt heo, thịt bò cytochrome oxidase I (COI), và 12s rRNA [5].hiện nay chủ yếu dựa trên màu sắc, mùi vị, độ Phương pháp hiện đại và chính xác nhất hiệndai của thịt bò nhưng đối với những loại thịt nay để phát hiện và phân biệt các loại thịt làbò tẩm hóa chất hay các sản phẩm đã qua chế PCR định lượng [6], tuy nhiên phương phápbiến thì phương pháp trên cho độ chính xác này đòi hỏi thiết bị hiện đại và hóa chất đắtthấp hoặc không thể thực hiện [2]. Trong tiền nên chưa được sử dụng phổ biến. Mộtnhững thập niên gần đây, nhờ sự phát triển của bước cải tiến mới của phương pháp PCR là 171Kỷ yếu Hội nghị khoa họcmultiplex PCR, đây là kỹ thuật giúp nhanh loại thịt này được thu thập tại các chợ và siêuchóng phát hiện nhiều gen mục tiêu trong thị. Sau khi thu thập, mẫu được mã hóa bảocùng một phản ứng từ đó rút ngắn được thời quản ở -80 oC đến khi sử dụng.gian đưa ra kết quả cũng như tận dụng được Phương phápcác thiết bị PCR truyền thống có mặt phổ biến Mẫu được rã đông mẫu ở nhiệt độ phòng, tiếnở các phòng thí nghiệm. Trong nghiên cứu này hành tách chiết DNA theo dẫn liệu của Lươngchúng tôi xây xây dựng bộ KIT để phân biệt Quý Phương [7]. Tuy nhiên, chúng tôi thaythịt heo và thịt bò dựa vào kỹ thuật multiplexđổi thời gian ly giải thịt từ 30 phút lên 1 giờPCR để giúp quá trình phân biệt các loại thịt và tủa DNA bằng isopropan thay vì sử dụngnày trở nên đơn giản hơn. Kết quả này hi vọng ethanol tuyệt đối. DNA sau khi tách chiếtgóp phần giảm vấn nạn gian lận thương mại được định tính bằng phương pháp điện diđối với sản phẩm thịt tươi cũng như c ...