Xây dựng kỹ thuậ t RT – PCR phát hiện viêm gan siêu vi C

Viêm gan siêu vi C là một trong những nguyên nhân gây xơ gan và ung thư gan. Quy trình kỹ thuật RT - PCR nhằm phát hiện xác định genotype HVC do chúng tôi xây dựng với mục đích giúp định hướng và theo dõi điều trị viêm gan siêu vi C
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng kỹ thuậ t RT – PCR phát hiện viêm gan siêu vi C X ây d ự ng k ỹ thu ậ t RT – PCR phát hi ệ n viêm gan siêu vi C đ ồ ng th ờ i đ ị nh g enotype HCV b ằ ng lai trên v ạ ch dò đ ặ c hi ệ u c ủ a thanh inoLIPA Hoàng Hi ế u Ng ọ c ( 1 ) , P h ạ m Hùng Vân ( 2 ) Tóm tắt Đặt vấn đề: Viêm gan siêu vi C là một trong những nguyên nhân gây xơ gan và ung thư gan (1-8 ). Qui trình kỹ thuật RT – PCR nhằm phát hiện, xác định genotype HCV do chúng tôi xây dựng với mục đích giúp định hướng và theo dõi điều trị viêm gan siêu vi C. Mục tiêu: Xây dựng kỹ thuật RT – PCR để phát hiện HCV đồng thời xác định kiểu gen của virus viêm gan C bằng kỹ thuật lai trên vạch dò đặc hiệu của thanh InoLipa của Bayers. Phương pháp nghiên cứu: Chúng tôi xây dựng kỹ thuật RT – PCR dùng mồi đặc hiệu cho vùng 5’ không mã hóa của bộ gen HCV có gắn biotin để phát hiện RNA HCV. Sau đó, những sản phẩm PCR này đ ược đ ịnh genotype bằng phương pháp lai trên vạch dò đặc hiệu INOLiPA do gắn sẵn chất đánh dấu biotin trước đó. 45 mẫu huyết thanh HCV (+) và 15 mẫu HCV (-) đã xác định bằng kỹ thuật RT – PCR thông th ường, l ấy trong thời gian từ 3/2005 đến 7/2005, được tiến hành thử nghiệm phát hiện RNA HCV bằng qui trình kỹ thuật mới cùng với kỹ thuật RT – PCR thông thường và kỹ thuật Nested PCR của Bayer. Những sản phẩm PCR có HCV (+) sẽ tiếp tục định genotype bằng phương pháp lai. Kết quả: Với mỗi qui trình PCR, chúng tôi đều thu được kết quả 45 mẫu HCV (+) và 15 mẫu HCV (-) nh ư ban đầu. Các mẫu HCV (+) từ kỹ thuật PCR thông thường không thể tiếp tục định genotype HCV vì không có chất đánh dấu biotin. Các mẫu HCV (+) từ kỹ thuật Nested PCR và kỹ thuật do chúng tôi xây dựng đ ều xác định được genotype và cho kết quả genotype giống như nhau. Kết luận: Qui trình kỹ thuật RT – PCR phát hiện RNA HCV bằng mồi có gắn biotin và định genotype HCV bằng phương pháp lai trên vạch do chúng tôi xây dựng và thử nghiệm đã thành công, cho kết quả chính xác như đối với kỹ thuật RT – PCR thông thường và Nested PCR. Abstracts Setting up the RT – PCR technique to detect hepatitis C virus and determine genotype HCV by hybrilizing PCR products on specific inoLIPA strip. Background: Hepatitis C virus is one of reasons that causes cirrhosis and hepatic cell carcinoma. The new RT – PCR technique is set up to detect HCV and determine its genotypes with the aim of orientating and following treatment of HCV. Objectives: Setting up RT – PCR technique to detect hepatitis C virus and determine genotype HCV by hybrilizing PCR products on specific Inolipa stripe. Method: The primers bound to biotin were designed specifically to 5’ noncoding region of HCV genome and detected RNA HCV by using RT – PCR. These PCR products then can be used to find HCV genotypes by hybridizing to immobilized probes on nitrocellulose stripes. 45 serum samples with HCV (+) and 15 serum samples with HCV (-), which had been known by ordinary RT – PCR, will be tested by new RT – PCR technique, ordinary RT - PCR and Nested PCR. Then PCR products with HCV (+) will be determined HCV genotypes. Results: From each process, we gather 45 positive samples with HCV and 15 negative samples as before. Positive HCV PCR products from ordinary RT – PCR can not be followed to find out HCV genotypes. Positive HCV PCR products from the last two processes can be used to determine HCV genotypes and results from them are the same. Conclusion: The new RT – PCR technique set up to detect HCV and determine its genotypes is success. The results from it are similar to from ordinary RT – PCR and Nested PCR. Đặt vấn đề ñònh ñieàu trò ñaëc hieäu cuõng nhö theo doõi ñöôïc hieäu quaû ñieàu trò Hieän nay, vieâm gan sieâu vi C laø thì vieäc xaùc ñònh kieåu gen HCV moät beänh lyù ñöôïc nhieàu nhaø trong maùu cuõng raát quan troïng. laâm saøng, dòch teã hoïc cuõng nhö Vieäc öùng duïng kyõ thuaät PCR trong nghieân cöùu y hoïc ñaëc bieät quan phaùt hieän nhöõng taùc nhaân vi sinh taâm. Nhöõng nghieân cöùu treân theá vaät ñaõ vaø ñang ñöôïc söû duïng ôû giôùi cho thaáy coù söï töông quan roõ Vieät Nam. Beân caïnh nhieàu giaù trò reät giöõa beänh gan maõn tính, xô lôïi ích hôn so vôùi caùc xeùt nghieäm gan vaø ung thö teá baøo gan vôùi huyeát thanh chaån ñoaùn, vaán ñeà (1-8) nhieãm HCV – thaäm chí coù lieân giaù ca ...