Xây dựng quy trình đánh giá hoạt tính enzym 5α-reductase từ mô tuyến tiền liệt người

Bài viết có mục tiêu nhằm xây dựng quy trình đánh giá hoạt tính enzym 5α-reductase từ mô tuyến tiền liệt người để sàng lọc các thuốc có tác động điều trị phì đại tuyến tiền liệt lành tính. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình đánh giá hoạt tính enzym 5α-reductase từ mô tuyến tiền liệt ngườiNghiên cứu Y họcY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018XÂY DỰNG QUI TRÌNH Đ[NH GI[ HOẠT TÍNHENZYM 5α-REDUCTASE TỪ MÔ TUYẾN TIỀN LIỆT NGƢỜITrần Thủy Tiên*, Nguyễn Đức Toàn*, Trần Mạnh Hùng*TÓM TẮTMục tiêu: Xây dựng qui trình đ{nh gi{ hoạt tính 5α-reductase in vitro từ mô tuyến tiền liệt người để sànglọc các thuốc có t{c động điều trị PĐTTLLT.Đối tượng v| phương pháp nghiên cứuMẫu thử nghiệm: Mẫu mô tuyến tiền liệt của bệnh nh}n PĐTTLLT được chỉ định phẩu thuật tại bệnh việnBình Dân, Tp. HCM với đầy đủ hồ sơ bệnh án và sự đồng ý của bệnh nhân.Quy trình tạo dịch đồng thể chứa enzym 5α-reductase: Mô tuyến tiền liệt được đồng nhất hóa, ly tâmthu cắn. Hòa cắn với dịch bảo quản và tiếp tục nghiền đồng thể cho đến khi thu được dịch đồng nhất.Định lượng protein trong dịch đồng thể enzym bằng phương ph{p BradfordĐịnh lượng testosteron bằng phương ph{p ELISA: Thực hiện theo hướng dẫn từ bộ Kit của công ty sảnxuất DRG, Đức.Khảo s{t điều kiện thực hiện phản ứng khử testosteron thành dihydrotestosteronCác yếu tố như nồng độ testosteron, nồng độ NADPH, lượng protein enzym, pH và thời gian phản ứngđược khảo s{t để chọn điều kiện phản ứng xảy ra với hoạt tính enzym cao.Kết quả: Qui trình tạo dịch đồng thể chứa 5α-reductase từ mô tuyến tiền liệt người xúc tác cho phản ứngchuyển testosteron thành dihydrotestosteron diễn tiến tốt ở pH = 5,5, lượng protein enzym tối thiểu 1,4 mg, nồngđộ testosteron khoảng 16 ng/ml (55 nM), nồng độ NADPH: 0,15 mM, nhiệt độ ủ: 37 ºC và thời gian ủ: 60 phút.Finasterid ức chế mạnh 5α-reductase chiết từ tuyến tiền liệt người với IC50 là 10,87 nM.Kết luận: Qui trình tạo dịch đồng thể enzym 5α-reductase v| điều kiện phản ứng khử testosteron thànhdihydrotestosteron có thể ứng dụng để sàng lọc thuốc có t{c động ức chế 5α-reductase.Từ khóa: Dịch đồng thể enzym, 5α-reductase, in vitro, finasteridABSTRACTDEVELOPING AN IN VITRO PROCEDURE FOR EVALUATION OF5α-REDUCTASE ACTIVITY FROM HUMAN PROSTATE TISSUETran Thuy Tien, Nguyen Duc Toan, Tran Manh Hung* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement Vol. 22 - No 1- 2018: 332 - 339Aim of study: This study aimed to develop an in vitro procedure for evaluation of 5α-reductase activity fromhuman prostate tissue that was applicable in drug screening.Material and methodsBHP tissue: tissue was collected from patients undergoing endoscopic surgery for BHP at Binh Dan hospitalwith complete medical records and agreement of acceptance.Procedure to prepare homogenate containing 5α-reductase: BHP tissue was sliced and homogenized. Centrifugethe homogenate and remove supernatant. Continue to homogenize to form and a homogenous suspension.* Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí MinhTác giả liên lạc: PGS. TS. Trần Mạnh HùngĐT: 0937746596332Email: manhhung1969@yahoo.comChuyên Đề DượcY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018Nghiên cứu Y họcProtein in the homogenate was assayed by Bradford methodTestosterone was assayed by ELISA: using the Kit provided by DRG, Germany.Optimizing reactive conditions to covert testosterone into dihydrotestosterone: factors such as testosteroneconcentration, NADPH concentration, amount of enzymatic protein, pH and reaction time were investigated toestablish high enzyme activity in the reaction.Results: Procedure to prepare homogenate from BHP tissue containing 5α-reductase catalyzed theconversion of testosterone to dihydrotestosterone under following conditions: pH 5.5, amount of enzymaticprotein at least 1.4 mg, testosterone concentration approximate 16 ng/ml, NADPH: 0.15 mM, reactiontemperature: 37ºC and reaction time: 60 minutes.Finasteride strongly inhibited 5α-reductase in the homogenate with IC50 of 10.87 nM.Conclusion: Procedure for preparation of enzyme homogenate containing 5α-reductase and reactionconditions can be applied as a screening tool for 5α-reductase inhibitors.Key words: enzym homogenate, 5α-reductase, in vitro, finasterideĐẶT VẤN ĐỀPhì đại tuyến tiền liệt l|nh tính (PĐTTLLT)là một bệnh lý thường gặp ở nam giới sau tuổi 40v| thường gây ra các triệu chứng ở đường tiểudưới. Với những tiến bộ trong điều trị, đặc biệt làcác kỹ thuật điều trị ngoại khoa, bệnh đã đượckiểm soát phần n|o v| thường không dẫn đến tửvong. Tuy nhiên, các triệu chứng của bệnh nhưđau buốt, tiểu đêm, khó tiểu gây ra sự phiền toái,khó chịu, làm ảnh hưởng đến chất lượng cuộcsống của bệnh nh}n, l|m tăng g{nh nặng bệnhtật v| chi phí điều trị ở người cao tuổi.Hiện nay việc điều trị PĐTTLLT bao gồmđiều trị nội khoa v| điều trị ngoại khoa, ngoài racòn sử dụng các loại thảo dược trong liệu phápđiều trị bổ sung, hỗ trợ. Hai nhóm thuốc được sửdụng phổ biến trong điều trị PĐTTLLT là thuốcchẹn α-adrenergic receptor (terazosin, alfuzosin)và thuốc ức chế 5α-reductase (finasterid,dutasterid).5α-reductase, một enzym gắn kết với màngnhân trong tế bà ...