Ảnh hưởng của việc bổ sung VEGF đến sự thành thục nhân của tế bào trứng heo

Nghiên cứu nhằm đánh giá ảnh hưởng của yếu tố tăng trưởng nội mao mạch (VEGF: Vascular Endothelial Growth Factor) đến sự thành thục nhân tế bào trứng heo. Phức hợp tế bào trứng (cumulus oocyte complexes–COCs) có từ 2 lớp tế bào cumulus trở lên và đồng đều tế bào chất sẽ được nuôi cấy thành thục trong 44 giờ.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ảnh hưởng của việc bổ sung VEGF đến sự thành thục nhân của tế bào trứng heo DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI ẢNH HƯỞNG CỦA VIỆC BỔ SUNG VEGF ĐẾN SỰ THÀNH THỤC NHÂN CỦA TẾ BÀO TRỨNG HEO Nguyễn Thị Ngọc Hân1 và Nguyễn Ngọc Tấn1* Ngày nhận bài báo: 08/10/2020 - Ngày nhận bài phản biện: 27/10/2020 Ngày bài báo được chấp nhận đăng: 11/11/2020 TÓM TẮT Nghiên cứu nhằm đánh giá ảnh hưởng của yếu tố tăng trưởng nội mao mạch (VEGF: Vascular Endothelial Growth Factor) đến sự thành thục nhân tế bào trứng heo. Phức hợp tế bào trứng (cumulus oocyte complexes–COCs) có từ 2 lớp tế bào cumulus trở lên và đồng đều tế bào chất sẽ được nuôi cấy thành thục trong 44 giờ. Môi trường nuôi cấy là TCM-199 có bổ sung 10% dịch nang noãn + 0,8% BSA và 10 UI hCG/ml. Protein VEGF được bổ sung ở các nồng độ khác nhau (50, 100, 200 ng/ml) và không bổ sung VEGF (0 ng/ml) được xem là đối chứng. Kết quả cho thấy tỷ lệ thành thục nhân của tế bào trứng heo tăng dần khi tăng nồng độ VEGF 0-200 ng/ml. Tỷ lệ thành thục nhân cao nhất ở nhóm COC nuôi cấy có bổ sung 200 ng/ml và thấp nhất ở nhóm đối chứng (82,9 so với 58,6%, PDI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔIcủa nhiều phòng thí nghiệm trên thế giới cho 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUmục tiêu nghiên cứu các vấn đề liên quanđến sản xuất phôi in vitro, vì (i) tính sẵn có 2.1. Vật liệu và địa điểmvà dễ thu nhận buồng trứng heo từ các lò mổ Buồng trứng heo (5-7 tháng tuổi), khốigia súc; (ii) thời gian nuôi thành thục kéo dài lượng 80-100kg được thu nhận tại lò mổ địatương tự như tế bào trứng người nên nhiều phương.cơ chế tác động được nghiên cứu để khám Các hóa chất chủ yếu mua từ Sigma,phá và ứng dụng. ngoại trừ một số hóa chất đặc biệt được chỉ ra Cải thiện môi trường nuôi cấy tế bào trứng trong bài.thông qua việc sử dụng yếu tố tăng trưởng đãđược nhiều nhà khoa học quan tâm (Kim và Thí nghiệm được thực hiện tại Phòngctv, 2006; Uhm và ctv, 2007; Nguyen và ctv, Công nghệ Phôi Động Vật, Viện Nghiên cứu2010), trong đó việc bổ sung protein VEGF Công nghệ Sinh học-Môi trường và Khoavào môi trường nuôi cấy tế bào trứng và/hoặc Khoa học Sinh học, trường Đại học Nông Lâmphôi đang thu hút sự tập trung nghiên cứu và Tp. HCM, từ tháng 10/2019 đến tháng 8/2020.đã có nhiều thành công về việc xác định thụthể VEGF (Berisha và ctv, 2000; Einspanier và 2.2. Phương phápctv, 2002; Bruno và ctv, 2009), cải thiện tỷ lệ 2.2.1. Thu nhận tế bào trứngthành thục tế bào trứng ở bò (Anchordoquy Thu nhận buồng trứng và tách tế bàovà ctv, 2015). Nghiên cứu này nhằm xác định trứng được thực hiện theo quy trình củanồng độ tối ưu của protein VEGF bổ sung vàomôi trường nuôi cấy cũng như xác định ảnh Nguyễn Ngọc Tấn và ctv (2019a,b), hình ảnhhưởng của VEGF bổ sung theo từng giai đoạn đại diện cho tế bào trứng có số lớp tế bàonuôi cấy đến khả năng khôi phục giảm phân ở cumulus khác nhau và đủ điều kiện cho nuôitế bào trứng heo. cấy được trình bày ở Hình 1. Hình 1. Tế bào trứng đủ điều kiện nuôi cấy IVM A, B là tế bào trứng loại A, B với độ phóng đại 300 lần2.2.2. Phương pháp đánh giá sự thành thục trong các trạng thái điển hình: GV (Germinalnhân tế bào trứng bằng nhuộm Aceto - Orcein Vesicle): quan sát được hình vòng nhẫn; Tế bào trứng sau 44 giờ nuôi cấy được GVBD (Germinal Vesicle Break Down) nhiễmloại bỏ lớp tế bào cumulus, sau đó được cố sắc thể dạng sợi mảnh thoát khỏi màng nhânđịnh mẫu và nhuộm Aceto-Orcein theo quy đang tiêu biến; MI (Metaphase I) nhiễm sắctrình của Nguyễn Ngọc Tấn và ctv (2019b). thể ở kỳ giữa giảm phân I (đóng xoắn cực đạiHình thái nhân của tế bào trứng được quan thể hiện thành một đĩa nhân); MII (Metaphasesát bằng kính hiển vi. Quan sát thấy một II) nhiễm sắc thể tập trung ở mặt phẳng xíchKHKT Chăn nuôi số 263 - tháng 3 năm 2021 ...