Định lượng vitamin trong đậu nành bằng phương pháp huỳnh quang

Nghiên cứu định lượng đồng thời các vitamin tan trong nước như thiamin hydroclorid (B1), riboflavin 5 monophosphat Na (B2), pyridonin hydroclorid (B6), các vitamin tan trong dầu như chdecalciferol (D3), α, Dtocopherol acebat (E) được khảo sát bằng các phương pháp huỳnh quang và HPLC. Mời các bạn tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định lượng vitamin trong đậu nành bằng phương pháp huỳnh quangY Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 9 * Phuï baûn cuûa Soá 1 * 2005Nghieân cöùu Y hoïcÑÒNH LÖÔÏNG VITAMIN TRONG ÑAÄU NAØNHBAÈNG PHÖÔNG PHAÙP HUYØNH QUANGPhuøng Thò Sinh*TOÙM TAÉTNghieân cöùu ñònh löôïng ñoàng thôøi caùc vitamin tan trong nöôùc nhö thiamin hydroclorid (B1), riboflavin5 monophosphat Na (B2), pyridonin hydroclorid (B6), caùc vitamin tan trong daàu nhö chdecalciferol (D3), α,Dtocopherol acebat (E) ñöôïc khaûo saùt baèng caùc phöông phaùp huyønh quang vaø HPLC.SUMMARYDETERMINING THE AMOUNT OF VITAMIN B1, B2IN FRESH SOYABEAN BY THE FLUORESCENT METHODPhung Thi Sinh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 9 * Supplement of No 1 * 2005: 13 – 16Studying of simultaneous quantitativity of water soluble vitamins as thiamin hydroclorid (B1),riboflavin 5 monophosphat Na (B2), pyridonin hydroclorid (B6), oil soluble vitamins as chdecalciferol (D3),α, Dtocopherol acebat (E) done by fluoroscopy and HPLC.ÑAËT VAÁN ÑEÀPhöông phaùpÑaäu naønh laø loaïi thöïc phaåm raát toát veà moïiphöông dieän, laø nguoàn cung caáp protein chuû yeáu cuûanhieàu daân toäc chaâu AÙ vaø ôû nöôùc ta. Ñaäu naønh coøn coùnhieàu loaïi vitamin vaø caùc chaát khoaùng ña löôïng vaø vilöôïng caàn thieát cho cô theå. ÔÛ caùc nöôùc AÂu, Myõ thôøigian gaàn ñaây ngöôøi ta môùi aên nhieàu ñaäu naønh vaø coùnhieàu coâng trình nghieân cöùu ñeå chöùng minh hieäuquaû cuûa noù.Ñeå ñònh löôïng vitamin B1 hieän nay coù raát nhieàuphöông phaùp khaùc nhau nhö: phöông phaùp vaät lyù,phöông phaùp hoaù hoïc, phöông phaùp sinh hoïc....Trong phaïm vi ñeà taøi naøy chuùng toâi ñònh löôïng B1baèng phöông phaùp huyønh quang.NGUYEÂN LIEÄUNGHIEÂN CÖÙUVAØPHÖÔNGPHAÙPNguyeân lieäu- Haït ñaäu naønh (500g)- Vitamin B1 chuaån (10g)- Vintamin B2 chuaån (10g)Caùc dung moâi vaø thuoác thöû ñaït tieâu chuaån kieåmnghieäm.Thieát bòMaùy ño huyønh quang SHIMADZUNguyeân taécVitamin B1 bò oxy hoaù bôûi kaly ferixyanua ôû moâitröôøng kieàm taïo thaønh thiocrom coù huyønh quangmaøu xanh da trôøi. Chieát thiocrom baèng isobutanol, ñomaät ñoä huyønh quang ôû böôùc soùng thích hôïp.Xöû lyù maãuCaân 100g ñaäu naønh ngaâm nöôùc 10 giôø, ñem xayloïc kyõ, naáu trong thôøi gian 20 phuùt, chia 4 maãu.Chieát vitamin B1 ra khoûi maãuCho dung dòch vaøo coác moû dung tích 250ml. Tieánhaønh song song vôùi dung dòch chuaån baèng caùch huùtchính xaùc 1 ml dung dòch chuaån vitamin B1 cho vaøocoác khaùc. Theâm vaøo moãi coác 100ml dung dòch HCl0,1N (pH = 1 – 1,5), ñaäy naép, ñun caùch thuûy soâi 45phuùt hoaëc ñun trong noài aùp suaát (to = 110 – 120oC)trong 35 phuùt (keå töø khi ñaït nhieät ñoä). Ñeå nguoäi ñeánnhieät ñoä phoøng, ñieàu chænh pH caùc coác baèng dung* Khoa Khoa Hoïc Cô Baûn, Ñaïi Hoïc Y Döôïc - TP.HCM13Oxy hoaù thiamin thaønh thiocromVôùi moãi dung dòch maãu ñònh löôïng, keå caû dungdòch chuaån, ñöôïc tieánhaønh song song treân 4 oángnghieäm nuùt maøi dung tích 40 – 50ml. Trong moãi oángchöùa saün 3g kaliclorua. Huùt chính xaùc 5ml moãi dungdòch loïc vaøo töøng oáng nghieäm trong 4 oáng, 2 oángñöôïc coi laø oáng traéng, 2 oáng ñöôïc coi laø oáng thöû cuûatöøng maãu.- Ñoái vôùi moãi oáng traéng cuûa caùc maãu ñöôïc tieánhaønh nhö sau: Laéc nheï oáng nghieäm baèng maùy laéc,theâm 3ml dung dòch natri hydroxyt 15%, laéc troän choñeàu, theâm nhanh 15ml isobutanol, ñaäy oáng, laéc maïnhtrong 15 giaây, ñeå laéng.- Ñoái vôùi caùc oáng thöû coøn laïi cuûa caùc maãu ñöôïctieán haønh nhö sau: Laéc oáng nghieäm baèng maùy laéc,theâm 3ml dung dòch chaát oxy hoaù (dung dòch kieàmkaliferixyanua K3Fe (CN6)), laéc troän ñeàu, theâm nhanh15ml isobutanol, ñaäy oáng, laéc maïnh trong 15 giaây, ñeålaéng caùc oáng nghieäm treân ñeå laéng cho taùch lôùp trongboùng toái trong 20 phuùt. Sau ñoù huùt hoaëc gaïn laáy 10mldung dòch isobutanol coù chöùa huyønh quang ôû beântreân.Ño huyønh quangÑo maät ñoä huyønh quang cuûa dung dòchisobutanol baèng maùy ño huyønh quang ôû böùôc soùngλ KT = 360nm vaø λ BX = 435nmXx =CcD − Dmtrx mtx100Dct − DctrPTrong ñoù:- Cc: haøm löôïng vitamin B1 trong maãu chuaån(mg)- Dct: maät ñoä huyønh quang trong oáng chuaån thöû- Dctr: maät ñoä huyønh quang oáng chuaån traéng- Dmt: maät ñoä huyønh quang trong oáng maãu thöû- Dmtr: maät ñoä huyønh quang oáng maãu traéng- P: khoái löôïng maãu caân (g)14Keát quaûDung dòch chuaån – Giaù trò soá oáng phaùt quangtreân maùyn123Maãu traéng10,3710,3710,37Oáng 1131313Oáng 226,526,526,5Oáng 3404040Oáng 1111111Oáng 2111111Oáng 3111111Dung dòch ñònh löôïngn123Maãu traéng101010Phöông trình ñöôøng chuaån vitamin B1y = 1,555x – 5,5R2 = 0,9994n1234cöôøn g ñoä phaùt quang (It)dòch Natriaxetat 2N ñeán pH = 4 – 4,5. Chuyeån toaønboä dung dòch ôû moãi coác sau khi ñöôïc chænh pH vaøobình ñöïng nöôùc 250ml vaø theâm nöôùc caát ñeán vaïch.Loïc dung dòch baèng giaáy loïc khoân ...