Xây dựng quy trình chẩn đoán đột biến gen yếu tố 8 gây bệnh hhemophila A

Nghiên cứu với mục tiêu nhằm xây dựng và chẩn hóa quy trình xét nghiệm xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophila A bằng kỹ thuật PCR và giải trình tự gen. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình chẩn đoán đột biến gen yếu tố 8 gây bệnh hhemophila AYHọcTP.HồChíMinh*Tập17*PhụbảncủaSố4*2013NghiêncứuYhọcXÂYDỰNGQUYTRÌNHCHẨNĐOÁNĐỘTBIẾNGENYẾUTỐVIIIGÂYBỆNHHEMOPHILIAANguyễnNgọcMinh*,ĐỗThịThanhThủy*,NguyễnThịBăngSương*TÓMTẮTMởđầu:BệnhhemophiliaAlàmộtbệnhditruyềndothiếuhụthaybấtthườngchứcnăngcủayếutốđôngmáuVIII.ĐâylàbệnhditruyềnlặnliênkếtnhiễmsắcthểgiớitínhXnênbệnhgặpchủyếuởnamgiớivànữgiớilàngườimanggenbệnh.Biểuhiệnbệnhtrênlâmsàngchủyếulàchảymáu,mứcđộchảymáucóthểlànhẹ,trungbìnhhoặcnặngtùythuộcvàonồngđộcủayếutốVIIItronghuyếttương.Chẩnđoánchínhxácvàđiềutrịsớmcănbệnhnàycómộtýnghĩaquantrọngnhằmhạnchếtốiđatìnhtrạngchảymáucũngnhưgiảmthiểukhảnăngbệnhnhântrởthànhtàntật.TiếnbộcủakỹthuậtsinhhọcphântửngàynaychophépphântíchDNAđểpháthiệnnhữngtổnthươnggengâyrabệnhhemophiliaA,pháthiệnngườilànhmanggenbệnhvàứngdụngtrongchẩnđoántrướcsinhcũngnhưtưvấnditruyền.Mục tiêu: XâydựngvàchẩnhóaquytrìnhxétnghiệmxácđịnhđộtbiếngenF8gâybệnhHemophilaAbằngkỹthuậtPCRvàgiảitrìnhtựgen.Đốitượngvàphươngpháp:PhântíchđộtbiếngenF8ởhaibệnhnhânnammắcbệnhHemophiliaAởthểnặngđãđượcchẩnđoántrênlâmsàng.DNAtừmáungoạivicủabệnhnhânsaukhitáchchiếtđượcdùnglàmkhuônchophảnứngPCRvới33cặpmồinhằmkhuếchđạitoànbộ26exonvàvùngnốiintron–exoncủagenF8.SảnphẩmPCRsauđóđượcgiảitrìnhtựvàphântíchkếtquảbằngphầnmềmchuyêndụngnhằmxácđịnhcácđộtbiếngâybệnh.Kếtquả:Tronghaibệnhnhânnamthamgiavàonghiêncứu,mộtbệnhnhânđượcxácđịnhmangđộtbiếndịchkhungdomất4nucleotidởexon14.BệnhnhâncònlạimangđộtbiếnthaythếnucleotideTbằngAcũngtrênexon14,độtbiếnnàytạoramộtstopcodonlàmngừngquátrìnhphiênmãngaytạivịtríđộtbiến.Kếtluận:Trongnghiêncứunày,chúngtôiđãthiếtkế33cặpmồivàchẩnhóathànhcôngquytrìnhphảnứngPCRvàgiảitrìnhtựcácvùngmãhóacủagenF8.Vớiquytrìnhnày,chúngtôicũngxácđịnhđượcđộtbiếngenF8gâybệnhHemophiliaAtrênhaibệnhnhânnam.Tronghaiđộtbiếnđượcxácđịnh,mộtđộtbiếnvônghĩachưatừngđượccôngbốtrêncáccơsởdữliệuvềHemophiliaA.Từkhoá:HemophiliaA,genyếutố8,độtbiến.ABSTRACTESTABLISHPROTOCOLFORDIAGNOSISOFMUTATIONINFACTORVIIIENCODINGGENECAUSINGHEMOPHILIAANguyenNgocMinh,DoThiThanhThuy,NguyenThiBangSuong*YHocTP.HoChiMinh*Vol.17‐SupplementofNo4‐2013:18‐23Introduction: HemophiliaAisanX‐linkedcongenitalbleedingdisordercausedbyFactorVIIIdeficiency.Different mutations including point mutations, deletions, insertions and inversions have been reported in theFVIIIgene,whichcausehemophiliaA.Objectives:EstablishastandardprotocoltodiagnoseandidentifygeneticmutationsthatcauseHemophiliaAdisorderbyPCRandSequencingmethods.*ĐạihọcYDượcTP.HCMTácgiảliênlạc:TS.BS.NguyễnThịBăngSương, ĐT:0914007038,ChuyênĐềĐiềuDưỡngKỹThuậtYHọcEmail:suongnguyenmd@gmail.com.19NghiêncứuYhọcYHọcTP.HồChíMinh*Tập17*PhụbảncủaSố4*2013Methods:Twomalepatients’peripheralbloodsampleswerecollectedtoconducttheresearch.ThesepatientshavesevereHemophiliaAsymptoms.DNAfrombloodsampleswereextractedusingQuiagenKitandperformedPCR with 33 pair of primers in order to amplify 26 exons with exon‐intron boundaries regions. The PCR‐amplifiedfragmentswerethensubjectedtoSequencinganalysis.Results: Inthecurrentstudy,withtheuseofPCRandsequencinganalysis,weidentifieda4‐ntdeletionmutantoccurringinexon14oftheFVIIIgeneandanonsensemutantcausedbyasubstitutionofAforTinexon14. This mutation that cause a premature stop‐codon at 732 has not previously been reported in the F8HemophiliaAMutation,Structure,TestandResourceSite(HAMSTeRS)database.Conclusion:WehavesuccessfullydesignedtheprimersetforamplificationthewholefunctionalFVIIIgeneandstandardizedthediagnosticprotocolforFVIIIgenemutant.Inaddition,wedetectedanonsensemutantthathasnotbeenreportbeforeontheHAMSTeRSdatabase.Keywords:FactorVIII,HemophiliaA,deletion,frameshift,nonsensemutants.do chấn thương dù rất nhẹ và khó cầm máu.ĐẶTVẤNĐỀHiệntượngchảymáukhớpkéodàivàtáiphátBệnhưachảymáuHemophiliaAlàbệnhdinhiềulầncóthểdẫntớibiếnchứngteokhớp,teotruyềnlặnliênkếtNSTXgâyradođộtbiếngencơ,lâudầnlàmmấtchứcnăngvậnđộng.BệnhyếutốVIII(F8)‐genchịutráchnhiệmtổnghợpnhâncầnđượcchẩnđoánbệnhcàngsớmcàngproteinFVIIIthamgiavàoconđườn ...