Hoàn thiện kỹ thuật RT-qPCR để đánh giá mức độ biểu hiện MRNA của gen SPAG8

Sự điều hòa quá trình sinh trưởng và biệt hóa tinh trùng ở nam giới do nhiều gen quy định. Gen SPAG8 (Sperm associated antigen 8) là một trong những gen tham gia vào quá trình đó mà vai trò của nó còn chưa được minh chứng rõ ràng. Bài viết trình bày việc hoàn thiện quy trình kỹ thuật RT-qPCR (Revese transcription - quantitative polymerase chain reaction) để đánh giá mức độ biểu hiện mRNA của gen SPAG8 ở nam giới vô sinh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Hoàn thiện kỹ thuật RT-qPCR để đánh giá mức độ biểu hiện MRNA của gen SPAG8 JOURNAL OF COMMUNITY MEDICINE 2021 HOÀN THIỆN KỸ THUẬT RT-QPCR ĐỂ ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN MRNA CỦA GEN SPAG8 Luyện Thị Thanh Nga1, Nguyễn Hoàng Việt1, Đoàn Thị Kim Phượng1,2, Đào Ngọc Bắc1, Đặng Đình Phúc Duy1, Trần Thị Huyền Trang1, Vũ Thị Hà1,2 TÓM TẮT technique in evaluating the mRNA expression level of Sự điều hòa quá trình sinh trưởng và biệt hóa tinh SPAG8 gene in blood samples from infertile males.trùng ở nam giới do nhiều gen quy định. Gen SPAG8 Material and methods: total RNA from 50(Sperm associated antigen 8) là một trong những gen tham peripheral blood samples (25 samples of infertile males,gia vào quá trình đó mà vai trò của nó còn chưa được minh 25 samples of control group) were extracted. The mRNAchứng rõ ràng. expression level of SPAG8 gene were determined Mục tiêu: Hoàn thiện quy trình kỹ thuật RT-qPCR using RT-qPCR assay. PCR products were tested by(Revese transcription - quantitative polymerase chain electrophoresis on agarose gel 1%.reaction) để đánh giá mức độ biểu hiện mRNA của gen Results: 100% mRNA samples were extractedSPAG8 ở nam giới vô sinh. successfully from the peripheral blood samples with Đối tượng và phương pháp: 50 mẫu máu ngoại vi accepted purity. cDNAs were synthesized successfully(25 mẫu của bệnh nhân vô sinh nam, 25 mẫu của nhóm (100%) from mRNA samples using reverse transcriptionchứng). Sử dụng kỹ thuật RT-qPCR để khảo sát biểu hiện technique. The quality of cDNA samples was examinedmRNA của gen SPAG8 từ các mẫu bệnh phẩm kể trên. by agarose electrophoresis after the PCR amplification Kết quả: 100% mẫu mRNA được tách chiết thành of GADPH.công từ máu ngoại vi với độ tinh sạch đạt chuẩn. 100% Conclusions: All stages of RT-qPCR procedurecDNA được tổng hợp thành công từ mRNA bằng quá were completed, each stage had its own criteria totrình sao mã ngược. Chất lượng cDNA được kiểm chứng control which ensured that the procedure works well, thebằng hình ảnh điện di trên thạch agarose sau phản ứng results can be analyzed clearly. Consequently, the mRNAPCR khuếch đại đoạn gen GAPDH. Kết luận: Hoàn expression level of SPAG8 gene in infertile male patientsthiện thành công quy trình kỹ thuật RT-qPCR với nhiều can be evaluated accurately.giai đoạn khác nhau, mỗi giai đoạn đều có các tiêu chuẩn Key worlds: Male infertility, mRNA, RT-qPCR,để đối chứng, đảm bảo cho quy trình được thành công và SPAG8.kết quả phân tích được rõ ràng và cho phép đánh giá mứcđộ biểu hiện mRNA của gen SPAG8 trên đối tượng nam I. ĐẶT VẤN ĐỀgiới vô sinh. Vô sinh là tình trạng một cặp vợ chồng trong độ tuổi Từ khóa: Vô sinh nam, mRNA, RT - qPCR, sinh đẻ, có sinh hoạt tình dục bình thường trên một năm vàSPAG8. không dùng biện pháp tránh thai nào mà không thể có thai1. Theo Tổ chức Y tế Thế giới, trong số các cặp vợ chồng SUMARY ở độ tuổi sinh sản gặp vấn đề về việc sinh con thì 30 - COMPLETE RT-qPCR TECHNIQUE IN 40% do nam giới, 40% do nữ giới, 10% do cả nam và nữ,EVALUATING THE mRNA EXPRESSION OF 10% không rõ nguyên nhân2. Vô sinh ở nam giới do nhiềuSPAG8 GENE nguyên nhân gây nên, mỗi nguyên nhân có những cách The regulation of spermatogenesis and sperm điều trị khác nhau. Để điều trị hiệu quả và có thái độ xử lýdifferentiation is controlled by different types of gene. đúng đắn, tư vấn di truyền, chẩn đoán nguyên nhân gây vôSPAG8 (sperm associated antigen 8) is a gene involving sinh nam giới là hết sức cần thiết.in the regulation process but the role of this gene remains Ngày nay, di truyền y học phát triển nhanh, mạnh; cóunclear. nhiều kỹ thuật xác định được các nguyên nhân di truyền Objectives: Complete the RT-qPCR (Reverse gây vô sinh mà trước đây được cho là vô sinh không rõtranscription - quantitative polymerase chain reaction) nguyên nhân, các xét nghiệm này đã và đang góp phần định1. Trường Đại học Y Hà Nội - Hanoi Medical University2. Bệnh viện ĐH Y Hà Nội - Hanoi Medical University HospitalChịu trách nhiệm chính: Vũ Thị Hà 0984736919 vuthiha@hmu.edu.vn 160 Số chuyên đề 2021 Website: tapchiyhcd.vnhướng cho can thiệp và điều trị. 2. Phương pháp nghiên cứu Gen SPAG8 (Sperm associated antigen 8) mã hóa cho Phương pháp mô tả cắt ngang.protein cùng tên, protein này được cho là có liên quan đến 2.2.1. Tách chiết mRNA: mRNA từ mẫu máu đượcquá trình sinh trưởng và biệt hóa tinh trùng3. Nghiên cứu tách chiết bằng bộ kit Qiagencủa Rong Li và cộng sự (2009) đã chỉ ra rằng SPAG8 tham 2.2.2. Tổng hợp cDNA: mRNA thu được với độgia vào quá trình tạo tơ phân bào khi tế bào phân chia, nó tinh sạch đạt chuẩn được chuyển thành cDNA bằng bộlàm chậm sự tăng sinh của tế bào bằng cách kéo dài pha kit RevertAid First Strand cDNA Synthesis (ThermoG2/M. Trong khi đó, SPAG8 lại khu trú ở tinh hoàn trong Fisher Scientific, ...