Đánh giá khả năng tiết IL-6 in vitro của tế bào được xử lí bằng phương pháp đồng nuôi cấy kết hợp giữa tế bào CAR-T với kháng thể kháng PD-1

Bài viết trình bày đánh giá khả năng tiết IL-6 của tế bào được xử lí bằng phương pháp đồng nuôi cấy kết hợp giữa tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 (PD-1 Ab) trên các dòng tế bào ung thư bạch cầu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đánh giá khả năng tiết IL-6 in vitro của tế bào được xử lí bằng phương pháp đồng nuôi cấy kết hợp giữa tế bào CAR-T với kháng thể kháng PD-1 NGHIÊN CỨU - TRAO ĐỔIhttps://doi.org/10.59459/1859-1655/JMM.449 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TIẾT IL-6 IN VITRO CỦA TẾ BÀO ĐƯỢC XỬ LÍ BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỒNG NUÔI CẤY KẾT HỢP GIỮA TẾ BÀO CAR-T VỚI KHÁNG THỂ KHÁNG PD-1 Nguyễn Thị Hiền Hạnh1, Bùi Khắc Cường1*TÓM TẮTMục tiêu: Đánh giá khả năng tiết IL-6 của tế bào được xử lí bằng phương pháp đồng nuôi cấy kết hợpgiữa tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 (PD-1 Ab) trên các dòng tế bào ung thư bạch cầu.Đối tượng và phương pháp: Nghiên cứu thực nghiệm, can thiệp trên 2 dòng tế bào ung thư CD19+ (Daudivà Raji) và 1 dòng tế bào CD19- (K562). Mỗi dòng tế bào, nghiên cứu trên 4 nhóm: nhóm điều trị tế bào đơnnhân máu ngoại vi (PBMC - nhóm chứng), nhóm điều trị PD-1 Ab, nhóm điều trị bởi CAR-T, nhóm điều trị PD-1Ab + CAR-T. Định lượng nồng độ cytokine IL-6 tại thời điểm 24 giờ và 48 giờ, sử dụng bộ sinh phẩm IL-6 ngườiELISA Kit.Kết quả: Hai dòng tế bào CD19+ (Daudi và Raji) có nồng độ IL-6 tương đương và thấp hơn so với tế bàoCD19- (K562) ở nhóm PBMC. Khi điều trị với CAR-T và CAR-T + PD-1 Ab, nồng độ IL-6 của tế bào CD19-(K562) cao hơn so với tế bào CD19+ (Daudi và Raji). Sau 24 giờ điều trị, nhóm CAR-T và CAR-T kết hợpPD-1 Ab có nồng độ IL-6 trong dịch nuôi cấy của tế bào K562 và Daudi tăng so với nhóm chứng (PBMC).Tuy nhiên, sau 48 giờ điều trị, nồng độ IL-6 giảm xuống. Hơn nữa, điều trị bởi PD-1 Ab làm tăng nồng độIL-6 ở tế bào CD19- (K562), nhưng giảm nồng độ IL-6 ở tế bào CD19+ (Daudi và Raji).Từ khóa: CAR-T, PD-1 Ab, IL-6.ABSTRACTObjectives: To evaluate the IL-6 secretion capacity of cells treated by co-cultured therapy of CAR-T cellsand anti-PD-1 antibody (PD-1 Ab) on leukemia cell lines.Subjects and methods: This is an experimental study, intervented on two CD19+ cancer cell lines(Daudi and Raji) and a CD19- cell line (K562). In each cell line, the study included four groups: treated byperipheral blood mononuclear cells (PBMC - control group), treated by PD1-Ab, treated by CAR-T andCAR-T/PD-1 Ab combined. IL-6 concentration was measured at 24 and 48 hours post-treatment usinghuman IL-6 ELISA Kit.Results: Two leukemia CD19+ cell lines (Daudi và Raji) showed comparable IL-6 concentration and lowerthan leukemia CD19- cell lines (K562) in PBMC groups. In the groups treated by CAR-T and CAR-T/PD-1Ab combined, IL-6 concentration was higher on CD19- (K562) cells compared to CD19- (Daudi và Raji).After treatment 24 hours, on K562 and Daudi cells, CAR-T and CAR-T/PD-1 Ab combined groups showedhigher IL-6 concentration than control (PBMC) groups. However, IL-6 concentration decreased at 48 hourpost treatment. Moreover, in PD-1 Ab treated groups, IL-6 concentration increased on CD19- (K562) cells butdecreased on CD19+ (Daudi and Raji).Keywords: CAR-T, PD-1 Ab, IL-6.Chịu trách nhiệm nội dung: Bùi Khắc Cường, Email: buikhaccuong@gmail.comNgày nhận bài: 02/5/2024; mời phản biện khoa học: 5/2024; chấp nhận đăng: 30/5/20231 Học viện Quân y.1. ĐẶT VẤN ĐỀ bào ung thư có khả năng trốn thoát miễn dịch hay Đáp ứng miễn dịch kháng tế bào ung thư của ức chế đáp ứng miễn dịch của các tế bào lymphotế bào lympho Tđã được chứng minh, nhưng đáp T [1]. Biến đổi cấu trúc tế bào lympho T bằng cáchứng miễn dịch này thường yếu hoặc không đủ để gắn thụ thể kháng nguyên dạng khảm (Chimericchống lại/loại bỏ đáng kể tế bào ung thư đã bị biến antigen receptors - CARs) tạo ra tế bào CAR-T làđổi. Nguyên nhân có thể do sự biểu hiện kiểu hình phát hiện mới, có hiệu quả tăng kích thích và hoạtrõ ràng, tính sinh kháng nguyên nghèo nàn, ít khả hóa đáp ứng của tế bào T chống lại tế bào ung thưnăng tương tác với tế bào ung thư. Mặt khác, tế [1], [2]. Thông qua sự gắn kết đặc hiệu giữa thụ thểTạp chí Y HỌC QUÂN SỰ, SỐ 370 (5-6/2024) 49NGHIÊN CỨU - TRAO ĐỔIkháng nguyên khảm trên tế bào CAR-T và kháng + Dòng tế bào ung thư bạch cầu mạn tính dòngnguyên đặc hiệu trên tế bào ung thư, nhiều tín hiệu tủy CD19(-): K562 (ATCC CCL-243). Các dòng tếxuôi dòng được hoạt hóa. Qua đó, thúc đẩy chức bào được nhập khẩu từ ATCC, Hoa Kỳ.năng miễn dịch của tế bào lympho T, như tiết các - Nguyên vật liệu nghiên cứu:nhân tố gây độc (trực tiếp), bài tiết các cytokine tấn + Môi trường nuôi cấy tế bào: TexMACS, RPMIcông vào tế bào ung thư (gián tiếp). bổ sung 10% dung dịch fetal bovin serum (FBS) và Chức năng kháng ung thư của tế bào T được 1% kháng sinh penicillin và streptomycin.điều hòa bởi tín hiệu PD-1 biểu hiện trên bề mặtcủa nó. Hoạt hóa tín hiệu PD-1 sau tương tác giữa + Vật tư tiêu hao: đĩa, chai nuôi cấy tế bào cácPD-1 và phối tử của nó (PD-L1 và PD-L2) ức chế kích thước (chai T75, T25; đĩa 10 cm, 6 cm, 6sự tăng sinh tế bào T, sản xuất cytokine và chức giếng, 12 giếng, 24 giếng). Ống falcon các kích cỡnăng tiêu tế bào [3]. PD-1 đóng vai trò quan trọng khác nhau (50 ml, 15 ml). Đầu côn, eppendorf, lọctrong việc ức chế phản ứng miễn dịch và thúc đẩy vi khuẩn 0,45 µm (ATCC, Hoa Kỳ) và một số dụngkhả năng tự dung nạp thông qua điều chỉnh hoạt cụ tiêu hao khác.động của tế bào T, kích hoạt quá trình tự hủy của + Trang bị phục vụ nuôi cấy tế bào: hệ thốngtế bào T đặc hiệu với kháng nguyên và ức chế quá phòng thí nghiệm sạch tiêu chuẩn, kính hiển vi soitrình tự hủy ...