Động học ức chế thủy phân protein dự trữ, xúc tác bởi papain từ quả đu đủ xanh

Động học ức chế thủy phân protein dự trữ, xúc tác bởi papain từ quả đu đủ xanh. The hydrolysis of reserve protein catalyzed by papain has been inhibited by Flavonoid. The inhibition was found competitive. Calculated constants of hydrolytic reaction have been estimated as following: VM = 0.67× 10-3 M.sec-1 ; k2 = 33.5 sec-1 ; Ks = 0.55× 10-5 M; Ki= 1.85× 10-3.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Động học ức chế thủy phân protein dự trữ, xúc tác bởi papain từ quả đu đủ xanhT¹p chÝ Hãa häc, T. 41, sè 1, Tr. 14 - 18, 2003 ®éng häc øc chÕ thñy ph©n protein dù tr÷, xóc t¸c bëi papain tõ nhùa qu¶ ®u ®ñ xanh §Õn Tßa so¹n 12-3-2002 trÇn ®×nh to¹i1, trÇn trung hiÕu2 1 ViÖn Hãa häc, Trung t©m KHTN&CNQG 2 ViÖn Nghiªn cøu kiÕn tróc, Bé X©y dùng Summary The hydrolysis of reserve protein catalyzed by papain has been inhibited by Flavonoid. The inhibition was found competitive. Calculated constants of hydrolytic reaction have been estimated as following: VM = 0.67×10-3 M.sec-1; k2 = 33.5 sec-1; Ks = 0.55×10-5 M; Ki = 1.85×10-3 M I - Më ®Çu i«taxetamit, p-clomercuribenzoat, N-(N-axetyl- 1-phenylalanyl), cystamin, amino axetonitril v Trong nhùa ®u ®ñ cã chøa 4 lo¹i proteaza l c¸c hîp chÊt ®isunfua kh¸c. C¸c chÊt n y lpapain, chymotpapain, peptidaza Av peptidaza chÊt øc chÕ kh«ng thuËn nghÞch. Nitril peptit lB. Trong ®ã, papain, cã ký hiÖu E.C.3.4.22.2, chÊt øc chÕ thuËn nghÞch ®èi víi papain [4].chiÕm h¬n 90% v l enzym cã ho¹t tÝnh thñy C¸c flavonoit còng cã ¶nh h4ëng øc chÕph©n m¹nh nhÊt [1, 2]. papain [5]. Papain mang tÝnh chÊt nh4 mét Papain ®4îc øng dông trong nhiÒu lÜnh vùcendopeptidaza, ®ång thêi còng nh4 mét cña nÒn kinh tÕ quèc d©n: trong c«ng nghiÖpexopeptidaza, thñy ph©n protein th nh thùc phÈm, c«ng nghiÖp nhÑ v trong y, d4îc.polypeptit, oligopeptit v c¸c axit amin. TÝnhchÊt ®Æc hiÖu cña papain rÊt lín ®èi víi c¬ chÊt, Nghiªn cøu quy luËt ®éng häc cña ph¶npapain cã kh¶ n¨ng thñy ph©n tÊt c¶ c¸c liªn kÕt øng thñy ph©n protein dù tr÷, xóc t¸c bëipeptit, trõ c¸c liªn kÕt cña prolin v axit papain, trong ®ã bao gåm c¸c ¶nh h4ëng øc chÕglutamic. Papain tõ nhùa qu¶ ®u ®ñ xanh cã cho phÐp hiÓu s©u b¶n chÊt cña qu¸ tr×nh ®Ó ®4aho¹t lùc thñy ph©n m¹nh ngang víi chÕ phÈm v o øng dông thùc tiÔn mét c¸ch cã hiÖu qu¶subsdilizin Bungari v m¹nh h¬n chÕ phÈm t¹o ra nh÷ng s¶n phÈm cã gi¸ trÞ dinh d4ìngNeutrase cña hGng Novo, §an M¹ch [3]. cao. Papain tõ nhùa ®u ®ñ xanh cã ®é bÒn cao II - Ph ¬ng ph¸p nghiªn cøu(khi cßn ë trong nhùa sÊy kh« t¹i 100oC bÒntrong 3 giê), bÒn v÷ng l©u khi tiÕp xóc víi oxi 1. Nguyªn liÖukh«ng khÝ, cã vïng ho¹t ®éng pH réng tõ 4,5®Õn 8,5. Papain ®4îc chiÕt ra tõ nhùa qu¶ ®u ®ñ xanh theo quy tr×nh ®G c«ng bè tr4íc ®©y [6]. C¸c chÊt øc chÕ papain l c¸c chÊt cã tÝnhoxi hãa nh4: oxi, ozon, hi®roperoxit, iotaxetat, 2. Ph ¬ng ph¸p14 Ho¹t tÝnh cña papain ®4îc x¸c ®Þnh theo dÞch enzym cÇn nghiªn cøu. Gi÷ ®óng 10 phót ëph4¬ng ph¸p Anson c¶i tiÕn. 30oC råi ®em ly t©m 5 phót ë tèc ®é 12.000 rpm. LÊy phÇn dÞch trong ë trªn ®Ó tiÕn h nha) Nguyªn lý cña phG¬ng ph¸p ph¶n øng n u. Ho¹t tÝnh cña papain ®4îc x¸c ®Þnh b»ng TiÕn h nh ph¶n øng m u: lÊy 0,5 ml dÞchl4îng tyrozin-s¶n phÈm t¹o th nh trong ph¶n trong t4¬ng øng nªu trªn cho v o èng nghiÖm,øng thñy ph©n protein (cazein l c¬ chÊt) do sau ®ã thªm v o 2,5 ml Na2CO3 0,5 M v l¾cpapain xóc t¸c. Ho¹t tÝnh cña enzym ®4îc biÓu ®Òu, ®Ó yªn 5 phót råi cho thªm 0,5 ml dungdiÔn b»ng ®¬n vÞ ho¹t ®é Anson. dÞch thuèc thö folin-ciocalteux ®G pha loGng 5 §¬n vÞ ho¹t ®é Anson l l4îng enzym m lÇn. L¾c ®Òu v ®Ó yªn 30 phót ë nhiÖt ®étrong 1 phót ë 30oC cã kh¶ n¨ng ph©n gi¶i phßng, sau ®ã ®o mËt ®é quang ë b4íc sãngprotein t¹o th nh c¸c s¶n phÈm hßa tan trong 670 nm. Tõ c¸c kÕt qu¶ thu ®4îc ®èi víi c¸caxit tricloaxetic cho ph¶n øng m u víi thuèc mÉu thùc nghiÖm, dùa v o ®4êng chuÈn ®Ó x¸cthö poli-ciocalteux t4¬ng ®4¬ng víi 1 µM ®Þnh ho¹t ®é enzym cña c¸c mÉu nghiªn cøutyrozin [3]. n y.b) Hãa chÊt III - kÕt qu¶ v& th¶o luËn Dung dÞch cazein 2%: 2 g cazein trongdung dÞch ®Öm photphat pH = 8, ®Þnh møc tíi 1. X¸c ®Þnh c¸c th«ng sè ®éng häc cña ph¶n100 ml. øng thñy ph©n protein dù tr÷ (cazein), Dung dÞch ®Öm photphat pH = 8 (Na2HPO4 xóc t¸c bëi papain tõ nhùa qu¶ ®u ®ñ- NaH2PO4) 0,1 M. xanh Dung dÞch chuÈn 1 µM tyrozin/ml: 18,12 §Ó x¸c ®Þnh c¸c th«ng sè ...