Nhân giống in vitro cây sâm bố chính

Nghiên cứu được tiến hành nhằm xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây sâm Bố Chính Hibiscus Sagittifolius Kurz từ cây in vitro do công ty TNHH MTV Ươm Mầm Việt cung cấp. Trên môi trường MS bổ sung 0,60mg/L BA (6– Benzyladenin), 100% đoạn thân sâm Bố Chính cảm ứng tạo chồi sau 21 ngày nuôi cấy. Hệ số nhân chồi đạt cao nhất (3,04 lần) sau 28 ngày nuôi cấy trên môi trường MS bổ sung 0,50mg/L BA kết hợp 0,2 mg/L kinetin.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nhân giống in vitro cây sâm bố chínhTạp chí Khoa học Lạc HồngSố 4 (12/2015), trang 42-46Journal of Science of Lac Hong UniversityVol. 4 (12/2015), pp. 42-46NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SÂM BỐ CHÍNHHibiscus Sagittifolius KurzNguyễn Thị Huyền Trang1, Vũ Thị Thu Hương2, Vưu Ng c Dung3Trịnh Thị Thanh Huyền4, Ngô Quang Hưởng51,2,3Khoa1huyentrang.sh111@gmail.com, 2thuhuongcnsh@gmail.comKỹ thuật Hóa học – Môi trường Trường Đại học Lạc Hồng, Đồng Nai, Việt Nam4,5Công ty TNHH MTV Ươm Mầm Việt, Đồng Nai, Việt NamĐến tòa soạn: 28/12/2014; Chấp nhận đăng: 5/2/2015Tóm tắt. Nghiên cứu được tiến hành nhằm xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây sâm Bố Chính Hibiscus SagittifoliusKurz từ cây in vitro do công ty TNHH MTV Ươm Mầm Việt cung cấp. Trên môi trường MS bổ sung 0,60mg/L BA (6–Benzyladenin), 100% đoạn thân sâm Bố Chính cảm ứng tạo chồi sau 21 ngày nuôi cấy. Hệ số nhân chồi đạt cao nhất (3,04lần) sau 28 ngày nuôi cấy trên môi trường MS bổ sung 0,50mg/L BA kết hợp 0,2 mg/L kinetin. Sau 28 ngày nuôi cấy, chồiin vitro tạo rễ bất định và tăng trưởng tốt nhất (5,26 rễ/chồi) trên môi trường MS bổ sung 0,50mg/L NAA(Naphthaleneacetic acid). Các cây con in vitro đạt tỷ lệ sống 80% trên giá thể xơ dừa ẩm sau 7 ngày thuần dưỡng.Từ khóa: Hibiscus Sagittifolius kurz; Sâm bố chính; In vitro; BA; KinetinAbstract. This study establisheda protocol for in vitro propagation of Hibiscus Sagittifolius Kurz usingplants in vitro of UomMam Viet Company. The stem segment culture was initiated on MS medium containing 0.60mg/L BA, 100% of explantsinduced shoots after 21 days of culture. The highest shoot multiplication rate (3.04 times) was obtained on MS mediumsupplemented with 0.50mg/L BA and 0.30mg/L Kinetin after 28 days of culture. Following 28 days of culture in vitro rootingshoots uncertainty and optimum growth (5.26 roots/shoot) on MS medium supplemented 0.50mg/L NAA. In vitro plantletsacclimatized themselves in green houses, and the transplants were adapted to natural conditions with a survival rate of 80%after 7 days.Keywords: Hibiscus sagittifolius kurz; In vitro; BA; Kinetin1. ĐẶT VẤN ĐỀ2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPSâm Bố Chính (Hibiscus Sagittifolius Kurz) thuộc họMalvaceae là một loại cây dược liệu quý [1]. Trong rễ sâmBố Chính có chứa Saponin triterpen là nhóm hợp chất quyếtđịnh những tác dụng dược lý điển hình của các cây họ NhânSâm (Araliaceae) có công dụng tăng lực, chống suy nhược,kém ăn, kém ngủ, chữa bệnh phổi và bạch đới [2]. Sâm BốChính có nguồn gốc ở phía nam Trung Quốc, sau phát triểndần xuống phía nam châu Á, trong đó có Việt Nam. Ở ViệtNam, sâm Bố Chính thường phân bố từ tỉnh Thanh Hóa vàođến các tỉnh phía Nam và một số điểm thuộc vùng núi thấpphía Bắc [3]. Với những công dụng trên cây sâm Bố Chínhđang bị khai thác quá mức, hạt có tỷ lệ nảy mầm thấp, chấtlượng cây không ổn định, khả năng lai tạp cao với các câycùng họ (cây Vông Vang, cây Bụp giấm, v.v.). Điều này đãlàm cho số lượng cây trong tự nhiên ngày càng giảm và khóbảo tồn được nguồn gen quý.Nghiên cứu được tiến hành với mong muốn tạo đượcgiống cây sâm Bố Chính tốt góp phần cải thiện chất lượ nggiống cây trong sản xuất cũng như bảo vệ nguồn dược liệuquý này. Song song với đề tài này, Phan D uy Hiệp vàcộng sự (2014) đã đưa ra những kết quả nghiên cứu về ảnhhưởng của chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên sự phátsinh hình thái ở một số loài sâm Bố Chính [4], tuy nhiênnhóm tác giả chưa đưa ra quy trình nhân giống in vitro câysâm Bố Chính và tỷ lệ sống của cây sau khi đưa ra vườnươm.2.1 Vật liệu nghiên cứuTạp chí Khoa học Lạc Hồng Số 0442 Tạp chí Khoa học Lạc Hồng Số 04Cây sâm Bố Chính (Hibiscus Sagittifolius Kurz) in vitrodo Công ty TNHH MTV Ươm Mầm Việt cung cấp.2.2 Phương pháp nghiên cứuThí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA đếnkhả năng tái sinh chồi cây sâm Bố ChínhCác đoạn thân tách từ cây in vitro trưởng thành được cấychuyền sang môi trườ ng nền MS (Murashige và Skoog) bổsung 0 – 1,00 mg/L BA để khảo sát nồng độ BA tối ưu chotái sinh chồi.Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA vàKinetin đến khả năng nhân chồi cây sâm Bố ChínhCây sâm Bố Chính in vitro được cắt thành từng đoạnthân mang chồi ngủ có kích thước 1 – 1,5 cm được cấy vàomôi trường MS có bổ sung 30g saccarose/L; 8,2 g agar/L;pH 5,8 và nồng độ BA (0 – 1,00 mg/L), kinetin có nồng độ(0 – 0,40 mg/L), các chất này được kết hợp với nhau để tìmra môi trường nhân chồi cho cây.Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA vàNAA đến khả năng nhân chồi cây sâm Bố ChínhĐoạn thân mang chồi ngủ tách từ cây in vitro trưởng thànhcó kích thước 1 – 1,5 cm được cấy vào môi trường MS có bổsung 30g saccarose/L; 8,2 g agar/L; pH 5,8 và kết hợp BA (0 –1,00mg/L) với NAA (0 – 0,40 mg/L) để xác định điều kiệnnuôi cấy tối ưu cho hệ số nhân chồi cao.Nguyễn Thị Huyền Trang;Vũ Thị Thu Hương;Vưu Ngọc Dung;Trịnh Thị Thanh Huyền;Ngô Quang HưởngThí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ NAA khả 0,60 mg/L. Chiều cao chồi tái sinh cao nhất tại môi trườngnăng tạo rễ cây sâm Bố Chínhcó bổ sung BA 0,60 mg/L (30,11 mm). Nồng độ BA tăngChồi in vitro được cấy trên môi trường MS có 30g cao hơn 0,60 mg/L tỉ lệ tái sinh chồi và chiều cao chồi giảmsaccarose/L; 8,2 g agar/L; pH 5,8, bổ sung NAA (0 – 0,75 do nồng độ BA cao kìm hãm khả năng tạo chồi và ức chếmg/L), để thăm dò khả năng tạo rễ.sự kéo dài chồi. Như vậy môi trường thích hợp để tạo chồiThí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ IBA (Indole- sâm Bố Chính là môi trườ ng MS bổ sung 0,60 mg/L BAButyric Acid) đến khả năng tạo rễ cây sâm Bố Chính(Hình 1).Chồ i in vitro được cấy trên môi trường MS có 30gsaccarose/L; 8,2 g agar/L; pH 5,8, bổ sung IBA (0 – 0,75 3.2. Nhân chồimg/L), để khảo sát khả năng tái sinh rễ và tạo cây hoàn 3.2.1 Ảnh hưởng của tổ hợp BA và Kinetin đến khảchỉnh.Đưa cây ra vườn ươm: Cây sâm Bố Chính in vitro hoàn năng nhân chồi cây sâm Bố ChínhCây sâm Bố Chính in vitro được cắt thà ...